大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒是用于定量检测大鼠样本中钙调素（CaM）水平的实验工具。该试剂盒基于酶联免疫吸附法（ELISA）的原理，通过特异性抗体与样本中的CaM结合，形成抗原-抗体复合物，进而通过酶标记的二抗和底物反应，产生可测量的信号，从而实现对CaM水平的定量检测。

实验原理：该试剂盒采用双抗体夹心法测定标本中大鼠钙调素(CAM)水平。通过纯化的大鼠钙调素(CAM)抗体包被微孔板制成固相抗体，加入待测样本中的大鼠钙调素(CAM)，再与HRP（辣根过氧化物酶）标记的大鼠钙调素(CAM)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的大鼠钙调素(CAM)浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在特定波长下测定吸光度（OD值），并通过标准曲线计算样品中大鼠钙调素(CAM)的浓度。

大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒

大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒结果影响因素：影响ELISA结果测定的因素主要包括标本因素、试剂因素和操作因素。例如，标本的采集、保存和处理方式可能会影响实验结果；试剂的质量和稳定性也会影响实验结果的准确性；操作过程中的温度、时间、洗涤次数等因素也可能对实验结果产生影响。

大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒注意事项：在使用大鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒时，需要注意以下几点：首先，确保实验环境干净、整洁，避免污染；其次，按照说明书的要求进行加样和操作；第三，严格控制实验过程中的温度和时间；第四，及时记录实验数据并进行分析；最后，注意实验结果的解读和判断。

应用^[4][5]

大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒可以用于小半夏汤对化疗性异食癖模型大鼠5-HT3R/CaM/CaMKⅡ/ERK1/2信号通路的影响

观察小半夏汤对顺铂、1-PBG致大鼠异食癖防治作用的基础上,以5-HT3R后第二信使作为切入点,探讨小半夏汤防治CINV的作用机制。

方法:1.制备小半夏汤冻干粉并用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)对小半夏汤冻干粉的有效成分进行质量控制研究。2.将Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、顺铂模型组、顺铂-昂丹司琼治疗组、顺铂-小半夏汤治疗组4组。腹腔注射6 mg/kg顺铂建立化疗性大鼠异食癖恶心呕吐模型,每24 h称量并记录各组大鼠摄食高岭土量、摄食饲料量和体质量。免疫荧光技术和大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒检测CaM和5-HT3R在小肠和脑的表达及共定位作用;Western Blot技术检测CaMKⅡ、pCaMKⅡ、ERK1/2、pERK1/2在小肠和脑的表达水平。

3. 将Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、1-PBG模型组、1-PBG-昂丹司琼治疗组、1-PBG-小半夏汤治疗组4组。腹腔注射25 mg/kg 1-PBG建立大鼠异食癖恶心呕吐模型,每24 h称量并记录各组大鼠摄食高岭土量、摄食饲料量和体质量。免疫荧光检测CaM和5-HT3R在小肠和脑的表达及共定位作用;Western Blot方法和大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒检测CaMKⅡ、p CaMKⅡ、ERK1/2、pERK1/2在小肠和脑的表达水平。

大鼠钙调素(CAM)Elisa试剂盒结果:1.小半夏汤冻干粉样品中6-姜酚的相对保留时间和相对峰面积结果为(15.285,4.3475);6-姜烯酚的相对保留时间和相对保留面积结果为(0.376,0.0984);麻黄碱的相对保留时间和相对峰面积结果为(17.097,43.9961);琥珀酸的相对保留时间和相对峰面积结果为(7.025,3.0048)。2.与正常对照组比较,顺铂模型组大鼠在造模后24 h和72 h摄食高岭土量均显著增加(P<0.05),说明大鼠异食癖模型造模成功;顺铂模型组大鼠小肠和脑组织中5-HT3R和CaM蛋白表达明显升高,共定位作用增强;顺铂模型组小肠和脑组织中CaMKⅡ、pCaMKⅡ、ERK1/2和pERK1/2蛋白表达增加(P<0.05)。

参考文献

[1]Methyl helicterte ameliorates liver fibrosis by regulating miR-21-mediated ERK and TGF-β1/Smads pathways[J].Quanfang Huang;;Xiaolin Zhang;;Facheng Bai;;Jinlan Nie;;Shujuan Wen;;Yuanyuan Wei;;Jinbin Wei;;Renbin Huang;;Min He;;Zhongpeng Lu;;Xing Lin.International Immunopharmacology,2019

[2]Columbamine suppresses hepatocellular carcinoma cells through down-regulation of PI3K/AKT,p38 and ERK1/2 MAPK signaling pathways[J].Zhenwen Lin;;Sheng Li;;Peng Guo;;Liyang Wang;;Lisheng Zheng;;Zixing Yan;;Xi Chen;;Zhuqin Cheng;;Haiyi Yan;;Cui Zheng;;Congkuai Zhao.Life Sciences,2019

[3]Intracellular emetic signaling evoked by the L-type Ca 2+channel agonist FPL64176 in the least shrew(Cryptotis parva)[J].Weixia Zhong;;Seetha Chebolu;;Nissar A.Darmani.European Journal of Pharmacology,2018

[4]Therapeutic Effects of 6‐Gingerol,8‐Gingerol,and 10‐Gingerol on Dextran Sulfate Sodium‐Induced Acute Ulcerative Colitis in Rats[J].Feng Zhang;;Na Ma;;Yong‐Feng Gao;;Li‐Li Sun;;Ji‐Guo Zhang.Phytotherapy Research,2017(9)

[5]冯晓娣.小半夏汤对化疗性异食癖模型大鼠5-HT3R/CaM/CaMKⅡ/ERK1/2信号通路的影响[D].广东药科大学,2021.