人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa试剂盒是一种基于酶联免疫吸附法（ELISA）的检测工具，用于测定血清、血浆和其他相关生物流体中Aβ1-42的浓度。

人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa试剂盒

人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa试剂盒的工作原理主要包括以下步骤：

使用纯化的人β淀粉样蛋白1-42抗体包被微孔板，制成固相抗体。

向预先包被了抗人β淀粉样蛋白1-42抗体的酶标孔中，加入标准品和样本，温育后，再加入生物素标记的抗β淀粉样蛋白1-42抗体（或HRP标记的Aβ1-42抗体），形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。

经过彻底洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过绘制标准曲线计算出样本中Aβ1-42的浓度。

人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa试剂盒操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

在使用人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa试剂盒时，需要注意以下事项：

严格按照试剂盒的说明书进行操作，确保实验的准确性和可靠性。

样本的收集和保存应遵循适当的方法，避免溶血、高血脂等因素对实验结果的影响。

试剂的保存和使用应遵守相应的规定，避免试剂的污染和失效。

实验过程中应注意安全，避免直接接触有毒或有害的试剂。

应用^[4][5]

人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa试剂盒可以用于冠心病患者SYNTAX评分与人β淀粉样蛋白1-42的相关性临床研究

探索临床冠心病患者SYNTAX评分与人β淀粉样蛋白1-42的相关性。

方法:对我院2019年11月至2020年12月就诊的129例同时完成冠状动脉造影(Coronary Angiogram,CAG)和人β淀粉样蛋白1-42(Amyloid-β1-42,Aβ1-42)抽血人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa试剂盒检查的患者进行回顾性分析。根据查看CAG图像的结果,对这129例冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)患者进行SYNTAX评分(SYNTAX Score),SYNTAX评分由SYNTAX官方网站上的计算器计算所得。首先确定后降支血管的来源,从而区分左右优势冠脉;其次,对心脏冠状动脉系统的主要分支病变进行加权计算得分,并在有分叉、钙化、血栓形成、弥漫性病变等特殊病变时进行额外的加分,根据得分,将其分为SYNTAX评分低分组(0-22分)、SYNTAX评分中分组(23-32分)、SYNTAX评分高分组(≥33分)。分组结果为低分组共44例(男34例、女10例);中分组共48例(男30例、女18例);高分组共37例(男32例、女5例)。采用统计软件SPSS 25.0进行数据的统计分析,对SYNTAX低、中、高三组间的Aβ1-42、其它临床生化指标及基线资料的情况进行分析比较。

参考文献

[1]The Alzheimer’s Disease Amyloid-Beta Hypothesis in Cardiovascular Aging and Disease[J].Dimitrios A.Stakos;;Kimon Stamatelopoulos;;Dimitrios Bampatsias;;Marco Sachse;;Eleftherios Zormpas;;Nikolaos I.Vlachogiannis;;Simon Tual-Chalot;;Konstantinos Stellos.Journal of the American College of Cardiology,2020

[2]Uncovering the Networks of Topological Neighborhoods inβ-Strand and Amyloidβ-Sheet Structures[J].Luhan Zhai;;Yuko Otani;;Tomohiko Ohwada.Scientific Reports,2019

[3]The Role of Apolipoprotein E Isoforms in Alzheimer’s Disease[J].Alejandro R.Roda;;Laia Montoliu-Gaya;;Sandra Villegas.Journal of Alzheimer's Disease,2019

[4]Amyloid-Beta(1-40)Peptide and Subclinical Cardiovascular Disease[J].Kimon Stamatelopoulos;;Christine J.Pol;;Colby Ayers;;Georgios Georgiopoulos;;Aikaterini Gatsiou;;Emmanouil S.Brilakis;;Amit Khera;;Konstantinos Drosatos;;James A.de Lemos;;Konstantinos Stellos.Journal of the American College of Cardiology,2018

[5]陈秋月.冠心病患者SYNTAX评分与人β淀粉样蛋白1-42的相关性临床研究[D].福建医科大学,2022.