DNA-PK抗体的应用

背景^[1-3]

DNA-PK抗体是针对DNA依赖性蛋白激酶（DNA-PK）这一特定蛋白质的特异性抗体。DNA-PK是一种在DNA双链断裂（DSB）修复过程中起关键作用的核蛋白复合体。它主要参与非同源末端连接（NHEJ）这一DNA修复途径，对于维持基因组的稳定性和防止细胞癌变至关重要。

DNA-PK复合体由三个亚基组成：催化亚基DNA-PKcs（也称为PRKDC）、Ku70（也称为XRCC6）和Ku80（也称为XRCC5）。当DNA发生双链断裂时，DNA-PKcs与Ku70/Ku80异二聚体结合，形成有活性的DNA-PK复合体。该复合体随后参与NHEJ过程，将断裂的DNA末端连接起来。

DNA-PK抗体

DNA-PK抗体在研究中具有多种应用，例如：

检测DNA-PK蛋白的表达和定位：通过免疫组化、Western blotting等技术，可以使用DNA-PK抗体检测细胞或组织中DNA-PK蛋白的表达水平和亚细胞定位。

研究DNA-PK的功能：利用DNA-PK抗体进行免疫沉淀（IP）实验，可以研究DNA-PK与其他蛋白的相互作用，从而揭示其在DNA修复、细胞周期调控等方面的功能。

评估DNA损伤和修复：DNA-PK在DNA损伤修复中起关键作用，因此DNA-PK抗体的水平可能反映细胞对DNA损伤的响应和修复能力。

药物筛选和评估：针对DNA-PK的药物研发在癌症治疗中具有潜在应用价值。利用DNA-PK抗体，可以筛选和评估针对DNA-PK的药物效果。DNA-PK抗体通常用于检测DNA-PK的表达水平或活性，以帮助诊断和治疗某些疾病。例如，DNA-PK的过度表达或活性异常与某些癌症、自身免疫性疾病和神经系统疾病等有关。

应用^[4][5]

DNA-PK抗体可以用于DNA-PK的表达与肿瘤细胞增殖的关系及对DNA损伤药物敏感性的影响的研究

通过检测DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)的调节亚单位Ku70和催化亚单位DNA-PK cs在卵巢癌组织中和肿瘤细胞株中的表达,并观察用RNA干扰技术降调节Ku70和DNA-PK cs基因的表达后肿瘤细胞增殖性和细胞周期变化和对某些化学药敏感性的变化,以了解DNA损伤修复途径NHEJ(nonhomologous ending-joining)在肿瘤的发生、发展和肿瘤细胞耐药的产生过程中的作用,探讨将DNA-PK作为提高化疗敏感性,减少耐药发生的分子靶点的可能性。

方法:采用DNA-PK抗体免疫组织化学S-P法测定正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢初发癌和复发癌组织中以及卵巢癌细胞株A2780和宫颈癌细胞株HeLa中Ku70和DNA-PKcs的表达;用基因重组技术将根据Ku70和DNA-PKcs的基因设计合成的可形成DNA-PK短发卡结构的DNA片段插入真核表达质粒,构建Ku70和DNA-PK cs短发卡RNA表达质粒pSIRENKu70shRNA和pSIRENDNA-PKcsshRNA,经双酶切鉴定和DNA测序证实,将构建成功的重组质粒用脂质体转染的方法分别转染表达Ku70和DNA-PKcs的卵巢癌A2780细胞和宫颈癌HeLa细胞,产生RNA干扰(RNA interference,RNAi)作用使Ku70或DNA-PKcs基因特异性转录后沉默;用逆转录PCR(RT-PCR)测定转染前后Ku70和DNA-PKcsmRNA的水平;DNA-PK抗体免疫印迹法(Western-blot)测定基因转染前后Ku70和DNA-PKcs蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)和流式细胞技术(FCM)测定转染前后细胞的生存率及细胞周期分布和凋亡率,以及转染细胞与未转染细胞用顺铂、足叶乙甙或拓扑替康前后的IC50的变化。

DNA-PK抗体结果:Ku70和DNA-PKcs在正常卵巢、卵巢囊腺瘤和卵巢癌组织中都有不同程度的表达,两者在卵巢癌的表达阳性率明显高于卵巢囊腺瘤和正常卵巢组织(P<0.01),经统计学检验,两者在卵巢癌的表达的一致性好,虽然DNA-PKcs的阳性率低于Ku70,但差异无统计学意义(P>0.01)。不同组织类型的卵巢癌DNA-PKcs和Ku70的表达无差异。初发癌组织DNA-PKcs表达中阳性及强阳性(++-+++)为36%(13/36),复发后癌组织DNA-PKcs表达中阳性及强阳性(++-+++)为83%(30/36),复发癌组织较初发癌组织DNA-PKcs中阳性和强阳性表达明显增加(×2=16.686,P<0.01);复发前后自身比较,复发较初发DNA-PKcs表达增强29例,无变化5例,1减弱2例,配对秩和检验,差异有极显著性(Z=-4.630,P<0.01),复发后癌组织中DNA-PKcs表达较初发时明显增高,这种表达的变化与肿瘤初发时的病理类型、病理分级和临床分期无关。

参考文献

[1]Up‐regulation of DNA‐dependent protein kinase correlates with radiation resistance in oral squamous cell carcinoma[J].SatoruShintani;MarikoMihara;ChunnanLi;YuujiNakahara;SatoshiHino;Koh‐ichiNakashiro;HiroyukiHamakawa.Cancer Science,2005(10)

[2]Expression of Ku80 correlates with sensitivities to radiation in cancer cell lines of the head and neck[J].Hyo Won Chang;;Sang Yoon Kim;;So-Lyoung Yi;;Se-Hee Son;;Do Young Song;;Su Young Moon;;Jong Hoon Kim;;Eun Kyung Choi;;Seung Do Ahn;;Seong Soo Shin;;Kang Kyoo Lee;;Sang-wook Lee.Oral Oncology,2005(10)

[3]DNA Repair,Genome Stability,and Aging[J].David B.Lombard;;Katrin F.Chua;;Raul Mostoslavsky;;Sonia Franco;;Monica Gostissa;;Frederick W.Alt.Cell,2005(4)

[4]Acetylation of the C Terminus of Ku70 by CBP and PCAF Controls Bax-Mediated Apoptosis[J].Haim Y Cohen;;Siva Lavu;;Kevin J Bitterman;;Brian Hekking;;Thomas A Imahiyerobo;;Christine Miller;;Roy Frye;;Hidde Ploegh;;Benedikt M Kessler;;David A Sinclair.Molecular Cell,2004(5)

[5]田晓予.DNA-PK的表达与肿瘤细胞增殖的关系及对DNA损伤药物敏感性的影响的研究[D].华中科技大学,2007.