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ILP2抗体的应用

发布日期:2024/5/21 9:32:33

背景[1-3]

ILP2抗体也称为抑制细胞凋亡样蛋白2抗体(Inhibitor of Apoptosis Protein 2 Antibody),是一种用于研究ILP2蛋白表达和功能的工具。ILP2蛋白是一种在细胞凋亡和细胞存活中起重要作用的蛋白质,属于IAP(Inhibitor of Apoptosis Proteins)家族。

ILP2抗体通常用于免疫组化(IHC)、蛋白质印迹(Western Blotting,WB)等实验技术中,以检测ILP2蛋白在细胞和组织中的表达水平。这些实验技术可以帮助研究人员了解ILP2在细胞凋亡、细胞存活、肿瘤发生和发展等生物学过程中的作用和机制。

ILP2抗体的制备和应用需要遵循严格的实验规程和质量控制标准。通常情况下,ILP2抗体是通过免疫动物(如兔或鼠)获得的,并经过纯化和验证以确保其特异性和灵敏度。

ILP2抗体.png

ILP2抗体

制备ILP2(Inhibitor of Apoptosis Protein 2)抗体通常涉及一系列复杂的步骤,这些步骤通常在生物技术和生物制药公司或高级研究实验室中进行。以下是制备ILP2抗体的基本步骤:

1.选择抗原:

首先,需要获得或合成纯化的ILP2蛋白或其特定的抗原片段。这个片段应该包含ILP2的免疫原性区域,以便能够引发免疫反应。

2.免疫动物:

将ILP2抗原注射到免疫原性动物(如兔子、小鼠或大鼠)中,以激发其免疫系统产生抗体。这通常通过多次注射(称为加强注射)来完成,以增强免疫反应。

3.收集血清:

在免疫接种后,收集动物的血液样本,并从中分离出血清。血清中含有对抗原(即ILP2)的特异性抗体。

4.纯化抗体:

使用各种色谱技术和亲和纯化方法(如蛋白质A/G亲和色谱、抗原亲和色谱等)从血清中分离和纯化ILP2抗体。

5.抗体鉴定和表征:

通过Western blot、ELISA、免疫沉淀等实验方法,对纯化的ILP2抗体进行鉴定和表征,确保其特异性和亲和力满足研究或应用需求。

6.单克隆抗体的制备(如果需要):

如果需要高度特异性的单克隆抗体,可以从免疫动物的脾脏中提取B淋巴细胞,并通过杂交瘤技术将它们与骨髓瘤细胞融合。这些杂交细胞(杂交瘤)可以产生仅针对ILP2的单一类型的抗体(单克隆抗体)。

7.抗体的进一步处理:

根据实验或应用需求,对ILP2抗体进行进一步的处理,如偶联到荧光染料、酶或其他标记物上,以便进行更复杂的实验。

8.质量控制和保存:

对制备的ILP2抗体进行质量控制,确保其质量和稳定性满足标准。然后,将抗体保存在适当的条件下,以供后续实验使用。

应用[4][5]

ILP2抗体可以用于凋亡抑制蛋白样蛋白2对乳腺癌细胞生长的作用及机制

凋亡抑制蛋白样蛋白2(Inhibitor of apoptosis protein-like protein-2,ILP-2)属于凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族成员,是定位于人19号染色体(q13.3-13.4)上高度保守的基因,其过表达会使细胞迁移、增殖及凋亡失衡,进而促进癌细胞生长。2012年XIANG等利用双向电泳分析乳腺癌患者血清和健康人血清时发现,ILP-2在乳腺癌患者血清中异常高表达。据此我们推测,ILP-2与乳腺癌的发生发展密切相关,进一步探究ILP-2对乳腺癌细胞生长的作用机制,为乳腺癌靶向治疗及研制相应抗癌药物提供理论依据。

本研究利用免疫组化检测乳腺癌组织及癌旁组织中ILP-2的表达,通过分析34例乳腺癌组织及24例癌旁组织,结果显示ILP-2在乳腺癌组织中高表达。采用ILP2抗体Western blot检测乳腺细胞(HCC-1937、MX-1、MCF-7)中ILP-2的表达,Western blot结果表明,与乳腺正常上皮细胞相比较,乳腺癌细胞中ILP-2有高表达,进一步表明ILP-2与乳腺癌MCF-7细胞生长关系密切。进一步采用干扰片段(siRNA-3、siRNA-5、siRNA-NC)敲低ILP-2的表达,应用MTT法、刻痕实验、AO-EB染色法分别检测3株乳腺癌细胞的生长活性、细胞的迁移及细胞的凋亡,分析ILP-2对MCF-7细胞生长的作用。

ILP2抗体结果显示在敲低ILP-2表达的乳腺癌细胞中,细胞存活率及细胞迁移率都低于对照组,而细胞的凋亡率增加。因此,说明ILP-2能够有效促进细胞生长活性,增加细胞的迁移并有效抑制细胞的凋亡。为寻找在乳腺癌MCF-7细胞中与ILP-2相互作用的蛋白质,采用免疫共沉淀(CO-IP)及质谱技术,探究与ILP-2相互作用的蛋白质。通过ILP2抗体特异性,寻找与IgG对比明显的差异条带,进一步质谱技术鉴定,ILP2抗体结果显示ILP-2与CHK2有相互作用,免疫共沉淀联合免疫印迹反向得以验证。本研究深入探讨ILP-2促进乳腺癌细胞生长的分子机制,免疫印迹实验结果显示敲低ILP-2表达的MCF-7细胞中,Csapase-3、CHK2、pCHK2表达升高,Cdc25C、pCdc25C表达降低。说明ILP-2对MCF-7细胞增殖、凋亡的影响与CHK2调控的CHK2/Cdc25C信号通路有关。

参考文献

[1]Fumonisin B 1 inhibits apoptosis in HepG2 cells by inducing Birc-8/ILP-2[J].Anil A.Chuturgoon;;Alisa Phulukdaree;;Devapregasan Moodley.Toxicology Letters,2015

[2]IAPs and cell migration[J].Laurence Dubrez;;Krishnaraj Rajalingam.Seminars in Cell and Developmental Biology,2015

[3]Knockdown of WWP1 inhibits growth and induces apoptosis in hepatoma carcinoma cells through the activation of caspase3 and p53[J].Qian Cheng;;Xiaoxiao Cao;;Fuwen Yuan;;Guodong Li;;Tanjun Tong.Biochemical and Biophysical Research Communications,2014(3)

[4]The inhibitors of apoptosis(IAPs)as cancer targets[J].Allison M.Hunter;Eric C.LaCasse;Robert G.Korneluk.Apoptosis,2007(9)

[5]朱林.凋亡抑制蛋白样蛋白2对乳腺癌细胞生长的作用及机制[D].吉首大学,2019.

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