大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒是一种用于检测大鼠体内血管紧张素Ⅱ浓度的试剂盒。ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种基于抗体与抗原之间特异性结合原理的免疫检测方法，它具有高灵敏度、高特异性和高准确性等优点。

大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒的主要组成包括：

酶标包被板：用于承载固相抗体，通常是微孔板，每个孔都预先包被了抗胰蛋白酶的抗体。

标准品：用于绘制标准曲线，帮助计算样本中AT的浓度。

酶标试剂：即HRP标记的抗体，与样本中的AT结合后形成复合物。

洗涤液：用于洗涤酶标板，去除未结合的成分。

显色剂：与酶标抗体反应后产生颜色变化，用于定量检测AT的浓度。

终止液：用于停止显色反应，以便进行OD值的测定。

大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒

使用大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒可以用于血管紧张素Ⅱ-醛固酮在放射性心脏疾病中的表达

血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮是肾素-血管紧张素-醛固酮系统的重要组成成分,它们在心血管疾病的形成中起着重要的病理生理作用,在心脏出现疾病时心脏组织中的醛固酮、血管紧张素Ⅱ和血管紧张素转换酶(ACE)的合成都会增多。在另一方面,放射性心脏疾病(RIHD)通常表现为急或慢性心包炎、不断加剧的动脉硬化(比如冠状动脉疾病)、传导功能异常、瓣膜疾病,而且最显著的变化是心包和心肌纤维化。放射性心脏疾病的病理生理表现与血管紧张素-醛固酮引起的心血管病变是相似的。

本研究以Sprague-Dawley大鼠为研究对象,处理组接受X射线照射,对照组不接受X射线照射,3个月后,以RT-PCR方法检测心脏组织的血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体和血管紧张素转化酶(ACE)的转录水平;以大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒ELISA方法检测大鼠心脏组织的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮水平,探讨血管紧张素Ⅱ-醛固酮在放射性心脏疾病中的表达及其在放射性心脏疾病形成中的病理生理作用。

材料与方法一、材料普通级SD大鼠,雌雄各半,体重约180-220g,月龄3个月,购自中国医科大学动物中心,干预3个月后,以水合氯醛过量麻醉法处死大鼠取其心脏组织,储存于-85℃冰箱备用。

二、主要试剂和来源RT-PCR试剂盒,购自宝生物工程(大连)有限公司,动物RNAout试剂购自绵阳高新区天泽基因工程有限公司,大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒,醛固酮ELISA试剂盒,购自美国RapidBio Lab。

三、方法以Sprague-Dawley大鼠为研究对象,处理组接受X射线照射(照射15Gy组、照射18Gy组),对照组不接受X射线照射,3个月后以RT-PCR方法检测心脏组织的血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体和血管紧张素转化酶(ACE)的转录水平;以大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒ELISA方法检测大鼠心脏组织的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮水平。统计数据以均数±标准差表示,以SPSS13.0软件分析,组间比较用ANOVA分析,正态资料组间用LSD t检验,方差不齐用秩转换的非参数检验,P＜0.05有统计学意义。

大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)Elisa试剂盒结果与非照射组比较,照射组的AT1、ACE的转录水平、血管紧张素Ⅱ水平、醛固酮水平,15Gy组和18Gy组均有显著差异,P值分别是0.032、0.006(AT1);0.004、＜0.001(ACE);＜0.001、0.009(血管紧张素Ⅱ);0.008、0.007(醛固酮)。AT1、ACE、血管紧张素Ⅱ及醛固酮四种指标,两照射组之间比较无统计学差异,P＞0.05。

参考文献

[1]Radiation-induced cardiovascular diseases:Is the epidemiologic evidence compatible with the radiobiologic data?[J].Susanne Schultz-Hector;;Klaus-Rüdiger Trott.International Journal of Radiation Oncology,Biology,Physics,2007(1)

[2]Eplerenone Attenuates Myocardial Fibrosis in the Angiotensin II-Induced Hypertensive Mouse:Involvement of Tenascin-C Induced by Aldosterone-Mediated Inflammation[J].Tomohiro Nishioka;;Maiko Suzuki;;Katsuya Onishi;;Nobuyuki Takakura;;Hiroyasu Inada;;Toshimichi Yoshida;;Michiaki Hiroe;;Kyoko Imanaka-Yoshida.Journal of Cardiovascular Pharmacology,2007(5)

[3]Endothelial Protection,AT1 Blockade and Cholesterol-Dependent Oxidative Stress:The EPAS Trial[J].Henning Morawietz;;Sandra Erbs;;Jürgen Holtz;;Andreas Schubert;;Michael Krekler;;Winfried Goettsch;;Oliver Kuss;;Volker Adams;;Karsten Lenk;;Friedrich W.Mohr;;Gerhard Schuler;;Rainer Hambrecht.Circulation,2006(1 su)

[4]The Effect of Valsartan,Captopril,or Both on Atherosclerotic Events After Acute Myocardial Infarction[J]..Journal of the American College of Cardiology,2006(4)

[5]曾越灿.血管紧张素Ⅱ-醛固酮在放射性心脏疾病中的表达[D].中国医科大学,2008.