MYPT1抗体的应用

背景^[1-3]

MYPT1抗体是针对肌球蛋白磷酸酶靶标亚基1（Myosin Phosphatase Target Subunit 1）的特异性抗体。MYPT1在细胞信号传导和肌球蛋白磷酸酶活性的调节中起关键作用，因此MYPT1抗体在科研实验中常用于研究细胞运动、肌肉收缩、细胞骨架结构以及相关的生物学过程。

关于MYPT1抗体的具体应用，它可以在多种实验技术中使用，如Western Blotting（蛋白质印迹）、Immunohistochemistry（免疫组织化学）、ELISA（酶联免疫吸附测定）、Immunofluorescence（免疫荧光）等。这些技术可以帮助研究人员检测MYPT1在细胞和组织中的表达水平、定位以及与其他蛋白质的相互作用。

MYPT1抗体

MYPT1抗体的保存条件通常是-20℃，避免反复冻融。此外，不同的MYPT1抗体可能来自不同的物种（如兔、山羊等），并具有不同的亚型、规格和应用范围。因此，在选择和使用MYPT1抗体时，需要根据实验的具体需求和供应商提供的信息进行选择。

MYPT1在许多生物过程中都起着关键作用，包括肌肉收缩、细胞迁移、细胞周期调控等。因此，MYPT1抗体在生物学研究和临床诊断中具有重要应用价值。例如，研究发现MYPT1在多种疾病(如肌肉疾病、癌症等)中表达异常，因此MYPT1抗体可以作为这些疾病的生物标志物。此外，MYPT1抑制剂也被用于治疗某些类型的癌症，因此了解MYPT1在肿瘤组织中的表达和分布对于评估治疗效果和预测预后具有重要意义。

应用^[4][5]

MYPT1抗体可以用于肌球蛋白轻链磷酸酶调节亚基MYPT1调控肠上皮通透性的机制研究

MYPT1表达下降可能会降低肠上皮细胞紧密连接的紧密程度,引起肠上皮紧密连接通透性增加,造成黏膜屏障功能受损,从而阻碍肠黏膜损伤后修复,进一步加重结肠炎症状。我们的研究将阐明MYPT1调控肠上皮通透性的分子机制,探索了MYPT1与结肠炎发生、发展之间的关系,为临床上以MYPT1为靶点治疗炎症性肠病提供借鉴依据。

研究方法:1、细胞实验中,通过慢病毒感染Caco-2BBe细胞获得Mypt1表达敲低的Caco-2BBe-shMYPT1细胞。利用Mypt1敲低的Caco-2BBe细胞,进行异硫氰酸荧光素-葡聚糖跨上皮通透性测定(Fluorescein isothiocyanate(FITC)-dextran trans-epithelial permeability assay)、跨上皮电阻测定(Transepithelial electrical resistance,TER)和MYPT1抗体蛋白印迹(Western blot)等实验。研究敲低Mypt1对肠上皮细胞间通透性以及紧密连接蛋白表达的影响,探寻MYPT1调控肠上皮紧密连接通透性的分子机制。

2、动物实验中,利用肠上皮特异性敲低Mypt1(Mypt1+/f;villin-Cre)小鼠模型,检测炎症因子和细胞坏死相关基因的表达情况,结合小鼠肠道组织病理切片分析,探讨Mypt1基因缺失对小鼠肠上皮稳态的影响。体外实验中,利用MYPT1抗体获得的肠道组织检测Mypt1基因缺失对肠上皮通透性和紧密连接蛋白表达的影响。3、采用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)对Mypt1+/f;villin-Cre小鼠进行急性结肠炎造模,每天记录小鼠的体重变化,制作体重变化图。利用肠道组织和分离的肠上皮细胞进行体外分子实验,检测炎症因子和紧密连接蛋白的表达。

MYPT1抗体结果:1、敲低Mypt1表达的Caco-2BBe-shMYPT1细胞,其跨膜电阻TER值与对照组相比显著下降(对照组,202.0±4.9Ohm*cm2;敲低组,152.7±3.2Ohm*cm2;P<0.001),FITC-dextran通透性检测结果也表明其细胞透过率增加(对照组,0.007±0.002 mg/mL;敲低组,0.021±0.002 mg/mL;P<0.05)。2、体外实验显示,Caco-2BBe-shMYPT1细胞中Mypt1基因蛋白表达下降(对照组,1.00±0.07;敲低组,0.19±0.05;P<0.0001,对照组设定为1),紧密连接蛋白(Occludin、ZO-1)蛋白表达水平显著下降(ZO-1:对照组,1.00±0.07;敲低组,0.54±0.11;P<0.05,Occludin:对照组,1.00±0.08;敲低组,0.78±0.04;P<0.05,对照组设定为1)。荧光定量PCR结果显示孔道形成蛋白Claudin2显著上调(对照组,1.00±0.04;敲低组,1.55±0.12;P<0.01,对照组设定为1)3、动物实验显示,Mypt1+/f;villin-Cre小鼠肠上皮细胞坏死相关基因(Fadd、Ripk3、Mlkl、Ripk1)和炎症因子(TNF-α、IL-2、IL-1β、IL-4、IL-23、IL-5)表达与野生型小鼠无显著差异,但紧密连接蛋白ZO-1蛋白表达显著下降(野生型,1.00±0.13;Mypt1+/f;villin-Cre,0.42±0.09;P<0.01,野生型设定为1),FITC-dextran上皮通透性测定实验显示Mypt1+/f;villin-Cre小鼠肠上皮通透性显著增加(野生型,1.00±0.05;Mypt1+/f;villin-Cre,1.84±0.26;P<0.05,野生型设定为1)。

参考文献

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[4]Tales from the crypt:new insights into intestinal stem cells.[J].Gehart Helmuth;;Clevers Hans.Nature reviews.Gastroenterology&hepatology,2019

[5]王静.肌球蛋白轻链磷酸酶调节亚基MYPT1调控肠上皮通透性的机制研究[D].苏州大学,2024.