小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒是一种用于检测小鼠体内γ干扰素（IFN-γ）浓度的试剂盒。IFN-γ是一种重要的细胞因子，参与免疫调节和炎症反应等多种生物学过程。因此，该试剂盒在科研实验中常被用于研究小鼠免疫系统、感染性疾病、肿瘤以及自身免疫性疾病等领域。

小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒的主要组成包括：

酶标包被板：用于承载固相抗体，通常是微孔板，每个孔都预先包被了抗胰蛋白酶的抗体。

标准品：用于绘制标准曲线，帮助计算样本中AT的浓度。

酶标试剂：即HRP标记的抗体，与样本中的AT结合后形成复合物。

洗涤液：用于洗涤酶标板，去除未结合的成分。

显色剂：与酶标抗体反应后产生颜色变化，用于定量检测AT的浓度。

终止液：用于停止显色反应，以便进行OD值的测定。

小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒

使用小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒可以用于类风湿性关节炎并发抑郁症的影响因素分析及作用机制研究

类风湿性关节炎并发抑郁症的作用机制研究目的将临床病例与动物实验相结合,验证炎性细胞因子IFN-γ与KP代谢中IDO、KYN及QUIN等物质含量的相关性,探索RA合并抑郁症的发生机制,为RA与抑郁症共病的临床患者提供治疗新策略。

方法：从60例RA临床病例和体检者中分别随机选择30例抽取血样,通过ELISA试剂盒测定实验组和对照组人体中IFN-γ及KP代谢中各产物水平,比较RA患者和普通人群体内IFN-γ、IDO、KYN等物质含量的差异。为深入研究,本课题使用K/Bx N小鼠作为类风湿性关节炎动物实验模型。为了验证IFN-γ对诱导RA发生抑郁症的作用,我们将K/Bx N小鼠随机分为RA组(n=9)和RA+IFN-γ组(n=9)。C57BL/6J小鼠(n=9)作为对照组(C组)。C组和RA组不进行额外治疗,RA+IFN-γ组小鼠尾静脉注射50μg抗IFN-γ中和抗体,每两天注射一次,共注射两次。在注射前后,分别对所有小鼠进行行为学试验。行为测试后处死所有小鼠,在第一时间同步采集小鼠的脑和血清。通过小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒测定小鼠血清中IFN-γ、IDO、KYN、5-HT等物质含量。并进一步测定了小鼠双侧海马体中KYN、5-HT、TRP及与抑郁有关的神经毒性代谢物QUIN含量,因QUIN可激活NMDAR,本研究通过测定NMDAR亚基NR2B的蛋白表达来验证NMDAR是否发生改变。

小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒结果：经ELISA测定得出RA患者血清中IFN-γ、IDO及KYN含量高于对照组,TRP含量低于对照组。动物实验中,RA小鼠与对照组比较表现出抑郁样行为(糖水偏好度降低、强迫游泳和悬尾的不动时间增加)。当在小鼠尾静脉中注射IFN-γ中和抗体后,小鼠的抑郁样行为得到逆转。

小鼠γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒检测结果中RA小鼠血清中IFN-γ、IDO及KYN含量高于对照组,TRP含量低于对照组。RA小鼠海马体中5-HT、TRP含量低于对照组,QUIN、NR2B含量高于对照组。小鼠血清和脑内加入IFN-γ中和抗体后,各指标测定结果得到逆转。结论RA合并抑郁症的发生机制可能是:RA患者体内炎性细胞因子IFN-γ诱导TRP转化为KYN后,增多的KYN通过血脑屏障进入大脑导致神经毒性QUIN增多,QUIN激活NMDAR从而导致抑郁症的发生。小结RA患者具有明显的抑郁倾向,患者的关节活动能力是其伴发抑郁症最关键的危险因素。RA合并抑郁症的发生机制可能是IFN-γ激活IDO启动KP代谢,最终激活NMDAR所引起。

参考文献

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