Turbo 感受态细胞的转化

背景及概述^[1]

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA)，处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。Turbo菌株是生长最快的大肠杆菌菌株。平板上6.5小时可见克隆，营养液中摇菌4-6小时可提取质粒，缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；Turbo菌株可严格控制laclq的表达，可以克隆毒性基因；fhuA2突变赋予Turbo菌株对噬菌体T1的抗性；lacZΔM15的存在使Turbo可用于蓝、白斑筛选。Turbo感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

操作方法^[1]

1. Turbo感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）

并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC或

LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养6.5小时以上。

注意事项^[1]

1. 感受态细胞在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

质粒转化^[1]

将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA或5-10μl连接产物到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。

冰水浴中放置30分钟，不要晃动。

42℃热击60秒钟，不要晃动。

冰水浴中放置2分钟，不要晃动。

加入500μl的室温的SOC或LB培养基。

置于37℃摇床中，150-200rpm震荡复苏培养60分钟。

取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃过夜培养。

平板划线分离法

复苏培养结束后，4000rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100μl左右的液体，用200μl吸头轻轻吹打散菌块，取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化，连接产物转化用涂布法。

质粒快速转化步骤

对于氨苄青霉素抗性的质粒，将步骤2的时间缩短到5分钟，完成步骤4后，可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。

菌株抗性^[1]

对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素敏感

主要参考资料

[1] Turbo 感受态细胞说明书