T7pLysY感受态细胞的应用

概述^[1]

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA)，处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。T7pLysY菌株为大肠杆菌BL21增强型菌株，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，用于毒性或非毒性蛋白的表达。该菌株区别于BL21(DE3)pLysS和BL21(DE3)pLysE菌株的优势在于T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，LysY表达的T7溶菌酶保留了对T7 RNA聚合酶的抑制作用但缺失了水解细胞壁的酰胺酶活性，有利于降低基因的背景表达和避免诱导过程中细菌的裂解，菌株具有抗T1噬菌体感染等特点。T7pLysY表达感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于108cfu/μg DNA。

菌株抗性^[1]

对氨苄青霉素，壮观霉素，卡那霉素，链霉素和四环素敏感,对氯霉素有抗性。

储存条件^[1]

-70℃保存，避免反复冻融。

​操作说明^[1]

1. 取100μl冰上融化的AngYuBio Rosetta(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

应用 ^[2]

T7pLysY感受态细胞可用于毒性或非毒性蛋白的表达。序列，LysY表达的T7溶菌酶保留了对T7 RNA聚合酶的抑制作用但缺失了水解细胞壁的酰胺酶活性，有利于降低基因的背景表达和避免诱导过程中细菌的裂解，菌株具有抗T1噬菌体感染等特点。

主要参考资料

[1] T7pLysY感受态细胞说明书