Stbl3 感受态细胞的应用

背景及概述^[1]

Stbl3感受态细胞来源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低低错误重组的概率。经pUC19检测转化效率108 cfu/μg DNA。

操作方法^[1]

1. 取100μl冰上融化的Stbl3感受态细胞，加入目的DNA并用指尖轻轻拨打管底混匀(避免用枪吸打)，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

使用注意事项^[1]

1. 感受态细胞在冰上融化。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. Stbl3细胞生长速度快 8-10小时可见克隆。

4. 若用氨苄抗生素筛选，应使用含100 mg/ml ampicillin的平板。

应用^[2-3]

CN201110091757.2公开了一种可用于表达miR-122载体pSU6-miR-122的构建方法及用途，其步骤是：a、化学合成寡核苷酸链，反义链与有义链互补，在5’端添加上AGCT以产生粘性突出末端；b、有义链、反义链退火,形成带BamHI和HindIII粘性末端的片段；c、将片段连接至载体pSilencer-2.1-U6，载体由BamHI和HindIII双酶切；d、转化大肠杆菌Stbl3感受态细胞；e、筛选阳性克隆，得到表达miR-122的载体pSU6-miR-122质粒。该载体在抑制乙肝病毒的药物中的用途，抗乙肝病毒感染效率高，特异性强，对正常细胞无毒性，对乙肝病毒复制的抑制率为85.2%。

CN201710935589.8公开了一种基于CRISPR-CAS9慢病毒载体的基因敲除试剂盒，该试剂盒包括线性化的CRISPR-CAS9慢病毒载体和对应的T4连接酶及感受态细胞，其特征在于所述的线性化的CRISPR-CAS9慢病毒载体由核酸内切酶处理的环状载体构成，所述的T4连接酶是优化的T4连接酶，所述的感受态细胞是具有抑制重组特性的Stbl3感受态。该试剂盒能直接进行CRISPR-CAS9慢病毒载体的构建，其比国内外商品化试剂盒操作方便、且构建重组得速度快，可有效提高目前基于CRISPR-CAS9慢病毒载体的构建效率，降低基因敲除的费用。

主要参考资料

[1] Stbl3 感受态细胞说明书

[2] CN201110091757.2 一种可用于表达miR-122载体pSU6-miR-122的构建方法及用途

[3] CN201710935589.8一种基于线性化CRISPR?CAS9慢病毒载体基因敲除试剂盒及其应用