6-二甲基氨基嘌呤：一种蛋白质磷酸化抑制剂

6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）：一种嘌呤霉素类似物，可以破坏中期纺锤体的形成，并有促使染色体凝集的作用。

用途

蛋白质磷酸化抑制剂能阻止蛋白质的磷酸化进而抑制成熟促进因子（MPF）和细胞静止因子(CSF)的活性，同时也抑制了第二极体的排放，保证了孤雌激活卵母细胞的染色体为二倍体。6-二甲基氨基嘌呤(6-dimethylaminopurine，6-DMAP）是一种广泛应用的蛋白质磷酸化抑制剂，它阻止蛋白质的磷酸化进而抑制MPF和 CSF的活性，同时抑制了纺锤体形成时微管蛋白的磷酸化进而抑制了极体的排出，但6-DMAP不影响DNA的合成。它对卵母细胞的激活作用主要是维持p34^cdc2的磷酸化和抑制cyclinB 的磷酸化，抑制 MPF 的活性，同时由于cyclinB的降解导致MPF活性下降，细胞分裂由MII期向末期Ⅱ发展，从而使卵母细胞被激活。6-DMAP同CHX一样单独使用时对卵母细胞的激活作用较弱，也要与可以引起 Ca²⁺波动的因素协同作用才可以使卵母细胞达到充分激活。简单说：通过作用于特定的激酶而抑制一系列磷酸激酶参与的生化反应和细胞功能，破坏微管聚合中心，使微管不能形成，从而抑制极体的形成和释放。在多倍体研究中6-二甲基氨基嘌呤高效、低毒、经济、易溶于水等优点。^[1-2]

6-二甲基氨基嘌呤在藻类的DNA组成中含量为0.78-0.08 mol%，6-二甲基氨基嘌呤细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂[CDK])用于研究初生根伸长和分化过程中的DNA内复制。6-二甲基氨基嘌呤也被用于激活胚胎和卵母细胞，这些胚胎和卵母细胞通过成年体细胞的核移植产生克隆动物。^[3]

2018年我国科学家成功克隆出两只猕猴。这也是全球首例通过体细胞克隆技术(Somatic Cell Nuclear Transfer, SCNT)诞生的灵长类动物，其中一个操作步骤H：用ionomycin（离子霉素，钙离子载体）和DMAP（6-dimethylaminopurine，6-二甲基氨基嘌呤）完成胚胎激活后，出现了若干新的细胞核。^[4]

合成

方法一：氯代物在碳酸钾为碱，与DMF反应生成6-二甲基氨基嘌呤。具体操作：0.5 g氯化物与15 mL DMF和K₂CO₃加热10小时。减压去除DMF，加入5%碳酸氢钠溶液。用氯仿提取，用Na₂SO₄干燥，浓缩得到产物，用氯仿和己烷结晶得到重结晶的二甲氨基化合物。^[3]

方法二：第一步：5-氨基-4-（氰基甲酰亚胺基）-1H-咪唑; 二甲基胺 20°C氯仿溶液，5小时；第二步N，N-二甲基甲酰胺二乙基二缩醛在20°C的氯仿中; 7小时; 进一步的阶段。两部总收率75%。^[5]

参考文献

[1] 董迎辉. 栉孔扇贝雌核发育二倍体的人工诱导和细胞学观察[D]. 中国海洋大学, 2005.

[2] 王爱萍. 不同激活方法对猪卵丘细胞核移植效果的影响[D]. 西南大学, 2007.

[3] Agarwal, Anu, and Prem MS Chauhan. "Convenient dimethylamino amination in heterocycles and aromatics with dimethylformamide." Synthetic communications 34.16 (2004): 2925-2930.

[4] Liu, Zhen, et al. "Cloning of macaque monkeys by somatic cell nuclear transfer." Cell 172.4 (2018): 881-887.

[5] Alves, M. José, et al. "A New Approach to the Synthesis of N, N‐Dialkyladenine Derivatives." (2007): 4881-4887.