基因突变服务

背景^[1-6]

基因突变服务广泛应用于基因工程、生物医学等相关领域，基因突变是进行基因和蛋白质功能研究的重要手段。基因突变是指由于DNA碱基对的置换、增添或缺失而引起基因结构的变化，亦称点突变。通常可引起一定的表型变化。广义的突变包括染色体畸变。狭义的突变专指点突变。实际上畸变和点突变的界限并不明确，特别是微细的畸变更是如此。

野生型基因通过突变成为突变型基因。突变型一词既指突变基因，也指具有这一突变基因的个体。基因突变可以发生在发育的任何时期，通常发生在DNA复制时期，即细胞分裂间期，包括有丝分裂间期和减数分裂间期；同时基因突变和脱氧核糖核酸的复制、DNA损伤修复、癌变和衰老都有关系，基因突变也是生物进化的重要因素之一，所以研究基因突变除了本身的理论意义以外还有广泛的生物学意义。

基因突变为遗传学研究提供突变型，为育种工作提供素材，所以它还有科学研究和生产上的实际意义。在自然条件下发生的突变叫自然突变，由人工利用物理因素或化学药剂诱发的突变叫诱发突变。基因突变是生物变异的主要原因，是生物进化的主要因素。在生产上人工诱变是产生生物新品种的重要方法。根据基因结构的改变方式，基因突变可分为碱基置换突变和移码突变等。

一般来说，针对不同的研究目的有不同的突变策略，但大体可以分为定点突变(Site-directed Mutagenesis)和随机突变(Random Mutagenesis)两类，其中，定点突变能高效地改变目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。一般通过PCR方法引入定点突变，包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变技术被广泛地应用于蛋白质功能位点结构研究、酶活性优化、DNA元件功能或元件互作、基因治疗等方面。

体外定点突变技术通过PCR等方法向目的DNA片段中引入所需变化，包括碱基的插入、缺失、点突变等，从而迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是实验室中改造、优化基因常用的手段，也是研究蛋白质结构和功能之间复杂关系的重要工具。目前常用的基因体外定点突变方法有寡核苷酸引物介导的定点突变、PCR介导的定点突变及盒式突变等。基因突变服务在最短的时间内为客户提供高质量的突变体产物，可直接应用于各种下游研究：基因调控因子，DNA和蛋白互作，蛋白结构和功能，酶学活性位点的确定等。

操作过程：

1.将待突变基因克隆至突变载体上。

2.制备含突变碱基的单链模板。

3.PCR扩增，形成异源双链DNA。

4.将异源双链DNA转化到大肠杆菌感受态细胞。

5.筛选突变体同源双链DNA分子。

应用^[7][8]

1基因和蛋白质功能研究。

2.DNA疫苗和抗体的研究。

3.药物的研发筛选。

4.遗传病的研究和治疗。

5.蛋白互作研究、酶学活性位点的确定^。

6.用于基因突变相关疾病的诊断

在CDKN2A基因突变与晚期非小细胞肺癌患者临床病理特征及预后的相关性分析研究中采用第二代测序技术筛选肿瘤标本中的CDKN2A基因突变。卡方检验分析CDKN2A基因突变与晚期NSCLC临床病理特征之间的相关性。Logistic回归分析CDKN2A基因突变与临床一线治疗评效之间的相关性。Kaplan-Meier曲线和COX模型评估患者生存。结果:NSCLC患者CDKN2A基因突变率为3.81%(8/210)。

CDKN2A基因突变在鳞状细胞癌患者中更常见(P=0.005)。多数CDKN2A基因突变型患者一线治疗评效是疾病进展(PD),而野生型患者多为疾病控制(DCR)(P=0.012)。CDKN2A基因突变型患者的中位生存时间(OS)明显短于野生型患者(19.1vs42.8个月,P=0.010),并且突变型患者的无进展生存时间(PFS)也明显缩短(3.5vs9.7个月,P=0.001)。

多因素分析显示CDKN2A基因突变、T4期、淋巴结转移和ECOG高评分是影响晚期NSCLC患者生存的独立危险因素。结论:CDKN2A基因突变对晚期NSCLC患者的临床病理特征和预后有重要影响。CDKN2A基因突变患者的生存期明显缩短。

参考文献

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