人糖基化依赖的细胞黏附分子(GLYCAM-1)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人糖基化依赖的细胞黏附分子(GLYCAM-1)ELISA KIT是一种用于检测和研究人源样本中GLYCAM-1浓度的工具。GLYCAM-1是一种糖基化的细胞黏附分子，它参与细胞间的相互作用，并在多种生理和病理过程中发挥重要作用。

ELISA Kit通常包含一系列试剂和材料，用于执行酶联免疫吸附试验（ELISA）。该试验是一种常用的生物化学检测方法，通过抗原与抗体的特异性结合以及酶促反应来定量测定样本中的目标分子。

在使用人GLYCAM-1 ELISA Kit时，用户需要按照说明书中的步骤进行操作。一般而言，这些步骤包括样本准备、抗体包被、样本加入、酶标二抗孵育、底物反应和结果读取等。通过比较样本的吸光度值与标准品的吸光度值，可以计算出样本中GLYCAM-1的浓度。

人GLYCAM-1 ELISA Kit在生物医学研究中具有广泛的应用。例如，它可用于研究GLYCAM-1在细胞黏附、迁移和信号传导中的作用，以及在不同疾病状态下的表达变化。此外，该Kit还可用于药物筛选和临床诊断，以评估药物对GLYCAM-1表达的影响或监测患者体内GLYCAM-1的水平。

人糖基化依赖的细胞黏附分子(GLYCAM-1)ELISA KIT

人糖基化依赖的细胞黏附分子(GLYCAM-1)ELISA KIT操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4-5]

人糖基化依赖的细胞黏附分子(GLYCAM-1)ELISA KIT可以用于GlyCAM-1在自然发情绵羊子宫中的表达研究

使用人糖基化依赖的细胞黏附分子(GLYCAM-1)ELISA KIT研究GlyCAM-1在绵羊自然发情子宫组织中的表达变化,以期为周期发情绵羊子宫中GlyCAM-1的表达受孕酮诱导调控的推测提供支持。运用实时荧光定量PCR、人糖基化依赖的细胞黏附分子(GLYCAM-1)ELISA KIT和免疫印迹法对绵羊自然发情后子宫第10、12、14、16和18天GlyCAM-1 mRNA和蛋白表达变化进行检测。实时荧光定量PCR结果显示:在绵羊发情后的第1018天之间,子宫组织中GlyCAM-1的表达呈现先下降再上升的趋势,发情后的第10天GlyCAM-1在转录水平表达出现峰值,并且显著的高于另外4个时段(P<0.05),第12天GlyCAM-1 mRNA水平显著下降(P<0.05),第1416天的表达量保持相对恒定,第18天GlyCAM-1 mRNA水平再次显著升高(P<0.05),但仍低于第10天水平(P<0.05)。Western Blotting及人糖基化依赖的细胞黏附分子(GLYCAM-1)ELISA KIT检测结果显示:绵羊在自然发情后的第1018天,子宫内膜上的GlyCAM-1蛋白表达量的变化亦呈现出先下降后上升的趋势,与其他4个时间点相比第10天的蛋白表达量达到峰值(P<0.05),第1216天GlyCAM-1的蛋白表达量没有显著变化(P>0.05),GlyCAM-1的蛋白表达量在第18天显著升高(P<0.05)。GlyCAM-1在转录与翻译水平的表达变化一致,呈现先下降后上升的趋势。该结果为周期发情绵羊子宫中GlyCAM-1的表达可能受孕酮诱导调控的推测提供支持。

参考文献

[1]Molecular Cues to Implantation[J].S K.Dey;;H Lim;;Sanjoy K.Das;;Jeff Reese;;B C.Paria;;Takiko Daikoku;;Haibin Wang.Endocrine Reviews,2004(3)

[2]Cellular mechanisms of implantation in domestic farm animals[J].Jeffery A.Bowen.Seminars in Cell and Developmental Biology,2000(2)

[3]L-selectin and its biological ligands[J].Steven D.Rosen.Histochemistry,1993(3)

[4]Ligation of L-selectin on T lymphocytes activatesβ1 integrins and promotes adhesion to fibronectin.Giblin PA,Hwang ST;R.KT;et al.J Immunol.1997

[5]朱伯阳,刘迪,白若雨等.GlyCAM-1在自然发情绵羊子宫中的表达研究[J].中国农学通报,2018,34(11):123-127.