狗肾上皮细胞的应用

背景^[1-3]

狗肾上皮细胞是一种狗肾上皮细胞株。这些细胞是从表观正常的成年雌性可卡犬的肾脏中建立的，并经过克隆过程得到。当维持高细胞浓度时，狗肾上皮细胞能够形成大量的小管。为了形成这些小管，细胞需要每天两次换液以提供足够的养分。

与原始细胞株相比，狗肾上皮细胞的c-AMP检测水平较低，同时在forskolin刺激下读出的腺苷环化酶水平也较低。此外，其跨上皮抗性也比Super Dome和MDCK细胞低。在狗狗的泌尿系统中，上皮细胞的存在是正常的。它们通常存在于狗尿沉渣中，包括少量红细胞或白细胞以及上皮细胞。此外，年母畜尿中还会含有大量的鳞状上皮细胞，这些都是正常的生理现象。然而，如果狗狗的泌尿系统受到细菌感染，可能会导致尿道上皮损伤，使上皮细胞脱落，从而可能引发结石等问题。

另外，狗肾上皮细胞还与狗狗的配种健康程度有关。在狗狗的阴道中，未角化的细胞和角化细胞的比例可以反映狗狗的配种状况。当狗狗接近最佳配种时间时，阴道中角化上皮细胞的比例会增加，而未角化细胞和红血球的比例则会减少。

狗肾上皮细胞

狗肾上皮细胞培养操作

1)复苏狗肾上皮细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)狗肾上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)狗肾上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

狗肾上皮细胞可以用于猪骨汤胞内抗氧化活性评价模型的研究

由于骨汤对健康的功效为人们广泛相信,它成为一种长期且广泛被饮用的汤品。现有针对骨汤开展的生物学功效研究较少,饮用骨汤的益处缺乏数据支持。

通过针对性地构建细胞胞内抗氧化活性评价模型,确立评价骨汤在细胞内抗氧化能力合适的方法，通过该模型比较猪骨汤和清汤(工业汤)之间以及骨汤不同粒径组分之间胞内抗氧化能力,并结合骨汤生物化学和胶体化学性质对上述抗氧化能力的差异进行阐述,尝试获得骨汤在体内抗氧化作用机制的梗概,主要研究内容及结果如下：(1)构建骨汤的胞内抗氧化活性评价模型,通过对不同组织来源的细胞,细胞胞内本底自由基和外加氧化剂产生的影响等相关因素进行考察和筛选,最后确定了以上皮细胞系的人结肠癌细胞(Caco-2)和狗肾上皮细胞作为适合评价骨汤抗氧化活性的细胞模型。

(2) 通过比较化学法和细胞内抗氧化模型的结果,骨汤在化学法和胞内抗氧化模型存在极大的差异,这说明骨汤在化学水平和细胞水平的抗氧化作用机制可能不同,化学法测定骨汤直接作用于自由基,而在细胞内骨汤则更可能是通过作用于胞内抗氧化酶系而影响自由基水平。胞内抗氧化模型能相对更客观反映骨汤在体内发挥生物功效的作用。

(3) 通过构建的胞内抗氧化体系对骨汤和清汤的抗氧化活性进行平行的测定,骨汤和清汤表现出不同的抗氧化活性,在上皮细胞Caco-2胞内清汤和骨汤的抗氧化能力基本一致,而对狗肾上皮细胞清汤抗氧化能力不及骨汤,化学法测定清汤抗氧化能力强于骨汤,说明骨汤经过工业化处理得到清汤时发生了构造改变,并可能表现为化学水平和细胞水平的抗氧化作用差异。

(4)以胞内抗氧化体系对骨汤及其不同粒径组分的抗氧化活性进行对比测定,结果以Caco-2胞内抗氧化能力衡量的强弱顺序为真溶液、颗粒和骨汤原汤,而在狗肾上皮细胞的表现则相反。这两种上皮细胞代表了体内不同组织来源,这可能和骨汤经口进入消化道后,其具有生物学效应的成分会依照粒径大小在不同部位进行转运、吸收和作用有关系。

参考文献

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