CNE-2Z的应用

背景^[1-3]

CNE-2Z是一种人鼻咽癌细胞系，来源于一名患有鼻咽癌的患者的肿瘤组织。这种细胞系经过实验室的培养和传代，保持了遗传稳定性，并被广泛用于生物医学研究中，特别是在鼻咽癌的发病机制、药物筛选和基因治疗等领域。

CNE-2Z细胞系具有一些特定的生物学特性，如增殖速度快、易于培养和具有特定的基因表达模式。此外，CNE-2Z细胞系还可以用于制备细胞复苏产品，如CNE-2Z人鼻咽癌复苏细胞，并附有STR鉴定报告，以确保细胞的身份和遗传稳定性。

在研究中，CNE-2Z细胞系常被用来模拟鼻咽癌的生长和侵袭行为，以及研究鼻咽癌发生和发展的分子机制。此外，CNE-2Z细胞系也常被用作药物筛选的模型，以评估潜在抗癌药物对鼻咽癌细胞的杀伤作用。

然而，需要注意的是，虽然CNE-2Z细胞系具有一定的代表性，但并不能完全模拟真实的人体环境。因此，在将实验结果应用于临床之前，还需要进行更多的实验验证和临床研究。

CNE-2Z

CNE-2Z细胞系培养操作

1)复苏CNE-2Z细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)CNE-2Z细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)CNE-2Z细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

CNE-2Z可以用于沉默ATF5对鼻咽癌细胞凋亡及周期的影响

比较转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)沉默前后鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及细胞周期进程的变化,探讨ATF5沉默对鼻咽癌细胞凋亡及细胞周期影响的可能机制,为提高鼻咽癌治疗效果提供新思路。

方法:1)以鼻咽癌CNE-2Z细胞为研究对象,运用sh RNA-ATF5慢病毒载体感染CNE-2Z细胞(sh RNA-ATF5组),以慢病毒空载体感染CNE-2Z细胞(LV-sh RNANC)作为阴性对照组(NC组),未感染慢病毒CNE-2Z细胞作空白对照组(Control组)。

2) 利用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CNE-2Z细胞慢病毒干扰效率。

3) 采用流式细胞仪(Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS)Annexin VAPC单染法及Tunel免疫荧光检测ATF5沉默前后CNE-2Z细胞凋亡率的变化,运用碘化丙啶(Propidumiodide,PI)法流式细胞仪检测ATF5沉默前后CNE-2Z细胞周期进程的变化。

4) Western blot检测ATF5沉默及过表达对CNE-2Z细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,以及周期蛋白细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(Cyclin Dependent Kinase 4,CDK4)、细胞分裂控制蛋白激酶2(Cell division control protein kinase 2,Cdc2)和细胞周期素B1(Cyclin B1)表达水平的影响。

结果:(1)q RT-PCR和Western blot检测结果均显示,sh RNA-ATF5慢病毒载体能显著抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞ATF5的表达(P<0.01),干扰效率可达81.7%。

(2) 流式细胞仪分析显示,Control组、NC组及sh RNA-ATF5组CNE-2Z细胞凋亡率分别为3.61%±0.10,3.80%±0.18,6.26%±0.15,sh RNA-ATF5能显著增加CNE-2Z细胞凋亡率(P<0.01);Tunel实验也显示,sh RNA-ATF5组较Control组及NC组CNE-2Z细胞的染色强度显著增加。

(3) PI-FACS分析结果显示,sh RNA-ATF5组CNE-2Z细胞G1期的细胞数显著减少(P<0.01),而S期和G2/M期的细胞数均增多(P<0.05,P<0.01),以G2/M期为著。

(4) Western blot检测表明,sh RNA-ATF5组CNE-2Z细胞Bcl-2蛋白表达水平较Control组、NC组显著降低(P<0.01),而Bax蛋白表达水平却明显增加(P<0.01);且G1/S期调控蛋白Cyclin D1、CDK4及G2/M期调控蛋白Cdc2、Cyclin B1的表达水平显著减低(P均<0.01)。

(5) Western Blot结果显示,ATF5过表达的CNE-2Z细胞Bcl-2蛋白表达水平显著增加(P<0.01),而Bax蛋白表达水平却明显降低(P<0.01);且G1/S期调控蛋白Cyclin D1、CDK4及G2/M期调控蛋白Cdc2、Cyclin B1的表达水平均显著增加(P均<0.05)。

结论:(1)ATF5沉默能促进鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡,其可能部分与增加Bax蛋白表达水平及降低Bcl-2蛋白表达水平有关;(2)ATF5沉默能阻滞CNE-2Z细胞于G2/M期,其可能部分源于Cyclin D1/CDK4及Cdc2/Cyclin B1蛋白表达的下调。

参考文献

[1]Gambogenic acid triggers apoptosis in human nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells by activating volume-sensitive outwardly rectifying chloride channel[J].Jingjing Su;;Ting Xu;;Genling Jiang;;Mei Hou;;Mengru Liang;;Hui Cheng;;Qinglin Li.Fitoterapia,2019

[2]PROLIFERATING CELL NUCLEAR ANTIGEN ASSOCIATES TO PROTEIN COMPLEXES CONTAINING CYCLINS/CYCLIN DEPENDENT KINASES SUSCEPTIBLE OF INHIBITION BY KRPS DURING MAIZE GERMINATION[J].Sara Margarita Garza-Aguilar;;Javier Axosco-Marín;;Aurora Lara-Núñez;;Estefany Damaris Guerrero-Molina;;Aldo Tonatiuh Lemus-Enciso;;Elpidio García-Ramírez;;Jorge M.Vázquez-Ramos.Plant Science,2018

[3]Curcumol induces cell cycle arrest and apoptosis by inhibiting IGF‐1R/PI3K/Akt signaling pathway in human nasopharyngeal carcinoma CNE‐2 cells[J].Xumei Li;;Haowei Liu;;Juan Wang;;Jianli Qin;;Zhun Bai;;Bixia Chi;;Wei Yan;;Xu Chen.Phytotherapy Research,2018(11)

[4]Current Role of Chemotherapy in Nonmetastatic Nasopharyngeal Cancer[J].Tapesh Bhattacharyya;;Geethu Babu;;Cessal Thommachan Kainickal;;Luis Souhami.Journal of Oncology,2018

[5]仲秋月.沉默ATF5对鼻咽癌细胞凋亡及周期的影响[D].遵义医科大学,2020.