PC-3M-2B4的应用

背景^[1-3]

PC-3M-2B4是一种细胞系，通常用于科学研究和实验室环境中的细胞培养。这种细胞系经过优化，可以在特定的培养基中保持最佳的生长状态。

PC-3M-2B4细胞专用培养基是一种液体形态的培养基，其中包含了PC-3M-2B4细胞生长所需的各种成分。这种培养基的储存条件为2℃-8℃，需要避光储存，并且有效期为3个月。在使用这种培养基时，应遵循特定的操作步骤，如加入细胞、定期更换培养基等，以确保细胞的正常生长和繁殖。

此外，PC-3M-2B4细胞也可以用于细胞分裂中期染色体制备等实验。这种实验需要特定的试剂和操作步骤，如加入秋水仙素、离心收集细胞、固定和染色等，以获得高质量的染色体样本。

PC-3M-2B4

PC-3M-2B4细胞系培养操作

1)复苏PC-3M-2B4细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)PC-3M-2B4细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)PC-3M-2B4细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

PC-3M-2B4可以用于LASS2/TMSG-1基因沉默对人前列腺癌细胞生物学功能的影响及其机制

探讨LASS2/TMSG-1基因沉默对PC-3M-2B4细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。

方法将实验分为3组:空白对照组(仅转染PBS的PC-3M-2B4细胞)、无关阴性对照siRNA组及LASS2/TMSG-1 siRNA转染组。首先针对LASS2/TMSG-1基因,设计并合成siRNA;在脂质体介导下瞬时转染人前列腺癌PC-3M-2B4细胞24 h后分别采用Western blot和RT-PCR技术检测细胞内LASS2/TMSG-1蛋白及ATP6L mRNA表达水平;使用BCECF AM H+敏感荧光探针检测转染24、36、48、96 h后3组细胞的细胞内H+浓度;用MTT法检测细胞增殖;划痕修复实验和Transwell体外侵袭实验分别检测PC-3M-2B4细胞的迁移和侵袭能力。

结果转染LASS2/TMSG-1 siRNA 24 h后,LASS2/TMSG-1 siRNA组LASS2/TMSG-1蛋白表达与对照组相比下降65%,ATP6L mRNA表达水平与对照组比较提高75%。通过BCECF AM荧光探针检测LASS2/TMSG-1 siRNA转染组细胞内H+浓度明显下降,且与空白对照组及无关阴性对照siRNA组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测显示,PC-3M-2B4细胞在转染24、48 h后,3组细胞生长速度无明显差异(P>0.05);转染72 h后LASS2/TMSG-1 siRNA转染组细胞生长速度明显升高,与空白对照组、无关阴性对照siRNA组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。划痕修复试验和Transwell体外侵袭实验显示,转染LASS2/TMSG-1 siRNA 24 h后,与空白对照组及无关阴性对照siRNA组相比,能显著促进细胞迁移和侵袭能力(P<0.05)。

结论体外合成的siRNA能有效沉默LASS2/TMSG-1基因表达,同时上调V-ATPase质子泵中关键性亚基—ATP6L mRNA的表达水平,且基因沉默后其细胞内H+浓度下降,提示LASS2/TMSG-1基因可能与ATP6L相互作用、共同参与对细胞内pH值的影响,导致肿瘤细胞内外微环境的改变并影响肿瘤细胞的生物学行为,如增殖、迁移及侵袭能力。

参考文献

[1]p27 as Jekyll and Hyde:Regulation of cell cycle and cell motility[J].Michelle D.Larrea;;Seth A.Wander;;Joyce Slingerland.Cell Cycle,2009(21)

[2]The NM23 family in development[J].Aikaterini Bilitou;;Julie Watson;;Anton Gartner;;Shin-ichi Ohnuma.Molecular and Cellular Biochemistry,2009(1)

[3]Cloning,Mapping,and Characterization of a Human Homologue of the Yeast Longevity Assurance Gene LAG1[J].Hui Pan;;Wen-Xin Qin;;Ke-Ke Huo;;Da-Fang Wan;;Yao Yu;;Zhi-Gang Xu;;Qian-De Hu;;Kerong T.Gu;;Xiao-Mei Zhou;;Hui-Qiu Jiang;;Ping-Ping Zhang;;Yi Huang;;Yu-Yang Li;;Jian-Ren Gu.Genomics,2001(1)

[4]Mammalian Lass6 and its related family members regulate synthesis of specific ceramides.Mizutani Yukiko;Kihara Akio;Igarashi Yasuyuki.The Biochemical journal.2005

[5]徐晓艳.LASS2/TMSG-1基因沉默对人前列腺癌细胞生物学功能的影响及其机制[J].临床与实验病理学杂志,2014