DNA免疫制备抗体服务
发布日期:2020/2/5 10:44:14
背景[1-7]
DNA免疫制备抗体服务是帮助膜蛋白、其他复杂蛋白定制抗体,以及早期的DNA疫苗研发的有力工具。这种创新的DNA免疫技术可直接在体内产生抗原,无需在体外生产及纯化蛋白抗原。此技术可以使目标抗原在免疫宿主体内表达翻译,拥有接近天然状态的翻译后修饰,进而刺激机体产生强有力的免疫反应。DNA免疫是直接引起机体对外源蛋白免疫反应的免疫技术之一。
与传统免疫技术不同的是,DNA免疫技术,使抗原在体内产生,节省了免疫原的生产(例如:多次跨膜蛋白的生产)和纯化时间。此外,表达的蛋白能程度保持蛋白质的天然结构和适宜的翻译后修饰,这对于生产识别目标抗原天然结构的高亲和力治疗性抗体是非常重要的。
同时,这种免疫技术是生产膜蛋白或者其他难于产生抗体的抗原(例如:基因不明的未知蛋白,毒性蛋白,难溶性蛋白,稳定性低的蛋白,含有二硫键的蛋白或者其他的大结构域的蛋白)抗体最理想的方式。另外,DNA免疫被看做是DNA疫苗研发初期的一种新颖技术。
DNA immunization系统的其他优势:
1.仅需要in silico DNA序列
2.无需重组蛋白或多肽
3.强烈的抗体反应
4.节省时间和劳动力
5.生产高亲和力抗体
应用[8][9]
1.用于单克隆抗体开发中的研究进展
DNA免疫是将编码特异性抗原的重组表达载体转入动物体内,特异性基因序列在动物体内得以表达并诱导产生其特异性抗体的一系列免疫应答过程。目前,DNA免疫已成为多种保护性以及诊断性单克隆抗体研究和开发的主要技术手段,尤其对于在体外难以表达和纯化的抗原,DNA免疫比传统的蛋白免疫占绝对优势。DNA免疫在宿主细胞内表达抗原及递呈方式类似于病毒感染,既能产生体液免疫,又能产生细胞免疫,由此克服了传统蛋白质免疫方法的缺陷,为制备高质量单克隆抗体提供了良好的技术平台。
2. 用于蛋白多克隆抗体制备
在利用DNA免疫技术制备GATA1蛋白多克隆抗体实验中利用斑马鱼研究gata1基因在血液血管发育过程中的功能,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增了斑马鱼gata1基因编码区序列,构建了真核表达质粒pCAGGS-P7/gata1,采用质粒DNA免疫技术的方法免疫了BALB/c小鼠,制备了斑马鱼GATA1蛋白多克隆抗体。实验结果表明:构建的真核表达重组质粒pCAGGS-P7/gata1 DNA具有良好的免疫原性,在免疫小鼠后所获得的抗血清抗体效价达1∶500。Western blot和免疫荧光检测表明,抗血清能特异型地识别GATA1蛋白。
参考文献
[1]An improved and robust DNA immunization method to develop antibodies against extra-cellular loops of multi-transmembrane proteins[J].Meredith Hazen,Sunil Bhakta,Rajesh Vij,Steven Randle,Dara Kallop,Vicki Chiang,Isidro H?tzel,Bijay S Jaiswal,Karen E Ervin,Bing Li,Robby M Weimer,Paul Polakis,Richard H Scheller,Jagath R Junutula,Jo-Anne S Hongo.mAbs.2014(1)
[2]Potent monoclonal antibodies against Clostridium difficile toxin A elicited by DNA immunization[J].Chunhua Zhang,Ke Jin,Yanling Xiao,Ying Cheng,Zuhu Huang,Shixia Wang,Shan Lu.Human Vaccines&Immunotherapeutics.2013(10)
[3]A Novel Rabbit Monoclonal Antibody Platform To Dissect the Diverse Repertoire of Antibody Epitopes for HIV-1 Env Immunogen Design[J].Yuxin Chen,Michael Vaine,Aaron Wallace,Dong Han,Shengqin Wan,Michael S.Seaman,David Montefiori,Shixia Wang,Shan Lu.Journal of Virology.2013(18)
[4]DNA priming and influenza vaccine immunogenicity:two phase 1 open label randomised clinical trials[J].Julie E Ledgerwood,Chih-Jen Wei,Zonghui Hu,Ingelise J Gordon,Mary E Enama,Cynthia S Hendel,Patrick M McTamney,Melissa B Pearce,Hadi M Yassine,Jeffrey C Boyington,Robert Bailer,Terrence M Tumpey,Richard A Koup,John R Mascola,Gary J Nabel,Barney S Graham.The Lancet Infectious Diseases.2011(12)
[5]Two is better than one[J].Shan Lu.The Lancet Infectious Diseases.2011(12)
[6]Generation of a panel of monoclonal antibodies against atypical chemokine receptor CCX-CKR by DNA immunization[J].Shogo Takatsuka,Aya Sekiguchi,Masayuki Tokunaga,Akira Fujimoto,Joe Chiba.Journal of Pharmacological and Toxicological Methods.2011(3)
[7]Enhancement of antibody responses to native G protein-coupled receptors using E.coli GroEL as a molecular adjuvant in DNA immunization[J].Akira Fujimoto,Nanae Kosaka,Hikaru Hasegawa,Hiroshi Suzuki,Sumio Sugano,Joe Chiba.Journal of Immunological Methods.2011(1)
[8]叶尔那扎尔·努尔吐热,邱丽芬,张富春,张茂祥.DNA免疫技术在单克隆抗体开发中的研究进展[J].生物技术通报,2019,35(02):204-211.
[9]郭芬,曹灵慧,陈宇霖,欧柏青,吴秀山.利用DNA免疫技术制备GATA1蛋白多克隆抗体[J].激光生物学报,2018,27(02):161-165+154.
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