COS-7/非洲绿猴SV40转化的肾细胞的介绍

发布日期:2020/2/4 9:11:32

背景及概述[1]

COS-7/非洲绿猴SV40转化的肾细胞源自CV-1细胞株，经带有编码野生型T抗原的起始失活突变的SV40转染得到。COS-7/非洲绿猴SV40转化的肾细胞传代建议：1：2~1：3传代，2~3天换液1次，细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染。COS-7/非洲绿猴SV40转化的肾细胞冷冻及保存方法：

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；

（2）COS-7/非洲绿猴SV40转化的肾细胞存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。COS-7/非洲绿猴SV40转化的肾细胞培养方法如下：

1)将细胞稀释到1000个细胞/mL，接种到24孔板，每孔1ml。

2）接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。

3）每隔3天跟换1次培养液，保持G418浓度不变。

4）选择出在10~14天内使COS-7非洲绿猴SV40转化的肾细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。有研究构建人β防御素-1(hBD-1)稳定表达细胞株，并检测表达产物人p防御素-1对多种多重耐药菌的抗菌活性。方法是将重组质粒pCMV-hBDl通过阳离子脂质体转染于COS-7非洲绿猴SV40转化的肾细胞，经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株；提取细胞总RNA，RT-PCR检测目的基因在转录水平的表达；收集细胞培养上清液，Westernblotting检测hBDl基因蛋白的表达；将含有表达产物hBDl的细胞培养上清液分别同各耐药菌液混合，37℃孵育不同时间后涂布于LB平板，以各实验组和对照组的菌落数的比值作为该耐药菌的存活率。