TF-1 (人血液白血病细胞)的应用

背景^[1-3]

TF-1(人血液白血病细胞)是一种重要的科研细胞系，源于一名35岁日本男性的肝素化骨髓抽取样本，该患者具有严重的全血细胞减少症。这种细胞系于1987年由Kitamura T等人建立，具有独特的生长特性，完全依赖于IL-3或GM-CSF（粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子）进行生长，对IL-5无反应。

在形态上，TF-1(人血液白血病细胞)呈现为淋巴母细胞样。在细胞培养中，它们通常表现出半贴壁半悬浮的生长特性。这意味着在培养过程中，部分细胞会附着在培养瓶壁上，而另一部分细胞则会在培养基中悬浮生长。这种生长特性使得TF-1(人血液白血病细胞)在实验室中相对容易进行培养和传代。

此外，多种淋巴因子和细胞因子，如IL-1、IL-4、IL-6、IL-9、IL-11、IL-13、CSF（集落刺激因子）、LIF（白血病抑制因子）和NGF（神经生长因子）等，都对TF-1(人血液白血病细胞)具有作用。然而，值得注意的是，TF-1(人血液白血病细胞)不表达血型糖蛋白A和碳酸酐酶I。

在细胞培养过程中，TF-1(人血液白血病细胞)需要使用特定的培养基和条件。通常，它们被培养在含有10%胎牛血清（FBS）和5 ng/mL GM-CSF的RPMI 1640培养基中。此外，细胞培养环境需要保持空气、95%的CO2和37℃的温度。在进行细胞传代时，部分贴壁不牢的细胞可以直接吹起使之悬浮，然后将悬浮的细胞和贴壁的细胞收集到一起混匀后按比例接种到新的培养瓶中。

TF-1(人血液白血病细胞)

TF-1(人血液白血病细胞)培养操作

1)复苏TF-1(人血液白血病细胞)：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)TF-1(人血液白血病细胞)传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)TF-1(人血液白血病细胞)冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

TF-1(人血液白血病细胞)可以用于硼替佐米诱导TF-1细胞凋亡及其对SaLL4基因表达的影响

探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)诱导TF-1(人血液白血病细胞)凋亡的作用,及其对Sall4基因表达水平的影响。

方法:(1)MTT法检测TF-1(人血液白血病细胞)细胞增殖抑制率。(2)光学显微镜观察细胞的形态学改变。(3)电镜观察超微结构变化。(4)流式细胞仪检测Annexin V-FITC细胞凋亡率。(5)流式细胞仪分析细胞周期。(6)RT-PCR检测Sall4 mRNA的表达水平。

结果:(1)硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制TF-1(人血液白血病细胞)生长,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。24 h和48 h的药物半数抑制浓度(Halfmaximal inhibitory concentration of a substance,IC50)分别为52 nmol/L和27 nmol/L。

(2) 显微镜下观察TF-1(人血液白血病细胞)细胞皱缩变小,细胞密度明显下降。

(3) TF-1(人血液白血病细胞)电镜下观察可见凋亡小体。

(4) Annexin V-FITC检测显示随着硼替佐米作用浓度的增加,TF-1(人血液白血病细胞)凋亡率增加,呈剂量依赖关系(P<0.05)。

(5) 流式细胞仪分析TF-1(人血液白血病细胞)细胞周期,随着硼替佐米作用时间的增加,G2/M期细胞比例逐渐增高,而G0/G1和S期细胞比例则逐渐减少,呈时间依赖关系(P<0.05)。

(6) RT-PCR结果示Sall4基因在TF-1(人血液白血病细胞)上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加,Sall4 mRNA与β-actin mRNA表达量的积分光密度比值(Integral optical density ratio,V/B)水平下降(P<0.05)。

结论:硼替佐米能抑制TF-1(人血液白血病细胞)增殖,诱导其凋亡,呈时间-剂量依赖关系。Sall4基因在TF-1(人血液白血病细胞)上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加表达水平下降,呈时间-剂量依赖关系。

参考文献

[1]Overexpression of the novel oncogene SALL4 and activation of the Wnt/β-catenin pathway in myelodysplastic syndromes[J].Xiao Shuai;;Daobin Zhou;;Ti Shen;;Yongji Wu;;Jieping Zhang;;Xuan Wang;;Qian Li.Cancer Genetics and Cytogenetics,2009(2)

[2]Proteasome inhibitIon specifically sensitizes leukemic cells to anthracyclin-induced apoptosis through the accumulation of Bim and Bax pro-apoptotic proteins[J].A.Pigneux;;F.X.Mahon;;F.Moreau-Gaudry;;M.Uhalde;;H.de Verneuil;;F.Lacombe;;J.Reiffers;;N.Milpied;;V.Praloran;;F.Belloc.Cancer Biology&Therapy,2007(4)

[3]Bortezomib activity and in vitro interactions with anthracyclines and cytarabine in acute myeloid leukemia cells are independent of multidrug resistance mechanisms and p53 status[J].Hans Minderman;;Yunfei Zhou;;Kieran L.O’Loughlin;;Maria R.Baer.Cancer Chemotherapy and Pharmacology,2007(2)

[4]Bortezomib interactions with chemotherapy agents in acute leukemia in vitro[J].Terzah M.Horton;;Anurhadha Gannavarapu;;Susan M.Blaney;;David Z.D’Argenio;;Sharon E.Plon;;Stacey L.Berg.Cancer Chemotherapy and Pharmacology,2006(1)

[5]王兰.硼替佐米诱导TF-1细胞凋亡及其对SaLL4基因表达的影响[D].重庆医科大学,2011.