NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）的应用

背景^[1-3]

NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）是一种来源于人恶性多发性畸胎瘤的细胞系。这种细胞系被广泛用于生物医学研究，特别是在肿瘤生物学、细胞分化、药物筛选和再生医学等领域。

NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）细胞具有多种特点，使其成为科研领域的理想模型。首先，它们来源于畸胎瘤，这种肿瘤通常包含多种细胞类型，因此NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）细胞具有多种分化潜能。其次，这些细胞在体外培养条件下易于传代和扩增，使得它们成为持续的实验来源。此外，NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）细胞在特定条件下可以分化为多种细胞类型，如神经细胞、心肌细胞和骨骼肌细胞等，这使得它们成为研究细胞分化和发育机制的有力工具。

在细胞培养方面，NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）细胞通常需要特定的培养基和条件来维持其生长和活性。这些条件可能包括适当的温度、湿度、二氧化碳浓度以及含有必要生长因子的培养基。此外，为了保持细胞的稳定性和分化能力，传代和培养过程中的操作也需要格外小心。

除了常规的细胞培养实验外，NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）细胞还可以用于多种实验和研究。例如，它们可以用于药物筛选实验，以评估不同药物对畸胎瘤细胞的疗效。此外，NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）细胞还可以用于研究细胞分化、细胞凋亡、基因表达和信号转导等机制。

然而，需要注意的是，NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）是一种肿瘤细胞系，因此在实验过程中需要严格遵守生物安全规定和操作规程。同时，对于实验结果的分析和解读，也需要结合具体的研究背景和目的进行综合考虑。

NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）

NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）培养操作

1)复苏NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）可以用于细胞分裂周期相关基因CDCA8启动子的功能研究

为了探寻CDCA8启动子活性差异的可能原因和调控机制,本研究首先应用重亚硫酸盐测序技术(Bisulfite sequencing PCR,BSP)检测hESCs分化前后CDCA8启动子基础活性区甲基化状态的变化情况,在表观遗传调控水平探寻原因。随后在转录因子水平进行了分析：首先对CDCA8启动子区域可能存在的转录因子结合位点进行了生物信息学预测；然后应用Pull-down和蛋白质/DNA芯片技术,比较了hESCs.NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）和人胚胎成纤维细胞(human embryo fibroblasts cell,hEF)中与启动子结合的转录因子,并用EMSA和Western Blot实验进一步验证；最后通过定点突变、过表达实验分析了转录因子对启动子活性的作用。

研究发现,在小鼠胚胎早期发育的2-cell、4-cell和桑葚胚时期,启动子都有转录启动活性,启动了下游报告基因EGFP的表达。转基因小鼠的活体成像和多组织荧光素酶活性检测结果一致显示,CDCA8启动子在睾丸组织中有很强活性。转基因小鼠睾丸组织的冰冻切片免疫荧光染色和石蜡切片免疫组化分析显示,启动子仅在生精小管靠近基底膜的第一层细胞——精原细胞中启动荧光素酶的表达,随着管腔方向细胞分化／精子发生的进行,荧光素酶的表达消失,这与细胞水平的启动子活性一致。

BSP结果显示,hESCs分化前后启动子基础活性区甲基化状态未发生明显改变。Pull-down和蛋白质/DNA芯片实验筛选出了在hESCs.NTERA-2（人恶性多发性畸胎瘤细胞）中与启动子的结合量较hEF细胞大于2倍以上改变的转录因子。其中NFY的结合差异得到了EMSA和Western Blot的验证,并且定点突变和过表达实验表明,NFY的结合对CDCA8启动子活性起着重要作用,因此它在干细胞、癌细胞和正常细胞中与启动子结合的差异是启动子在这三类细胞中活性差异的重要原因。

参考文献

[1]Oct4-Induced Pluripotency in Adult Neural Stem Cells[J]..Cell,2009(3)

[2]Borealin is differentially expressed in ES cells and is essential for the early development of embryonic cells[J].Qianjun Zhang;;Ge Lin;;Yifang Gu;;Jianjun Peng;;Zaoyan Nie;;Yuelong Huang;;Guangxiu Lu.Molecular Biology Reports,2009(3)

[3]Strategies and New Developments in the Generation of Patient-Specific Pluripotent Stem Cells[J].Shinya Yamanaka.Cell Stem Cell,2007(1)

[4]Epigenetic regulation of Nanog gene in embryonic stem and trophoblast stem cells[J].NaokoHattori;YukoImao;KoichiroNishino;NakaHattori;JunOhgane;ShintaroYagi;SatoshiTanaka;KunioShiota.Genes to Cells,2007(3)

[5]戴灿.细胞分裂周期相关基因CDCA8启动子的功能研究[D].中南大学,2010.