NCI-H1975（人肺腺癌细胞) 的应用

背景^[1-3]

NCI-H1975（人肺腺癌细胞)是一种源自人肺腺癌的细胞系，常被用于生物医学研究中。这种细胞具有上皮细胞的形态和贴壁生长的特性，生长培养基一般为RPMI-1640加上10%的胎牛血清（FBS）和1%的P/S（青霉素/链霉素）。

NCI-H1975（人肺腺癌细胞)细胞系常被用于肺癌的发病机制、药物筛选、基因治疗等研究。由于它具有特定的遗传和表型特性，科学家们可以通过在体外培养这种细胞来模拟肺癌的生长和扩散过程，从而研究肺癌的生物学行为和药物敏感性。

此外，NCI-H1975（人肺腺癌细胞)细胞系也被用于评估不同药物对肺癌细胞的疗效。通过将这些细胞暴露于不同的药物中，科学家们可以观察药物对细胞生长、凋亡和迁移等过程的影响，从而筛选出具有潜在疗效的药物。

需要注意的是，NCI-H1975（人肺腺癌细胞)是一种肿瘤细胞系，因此在实验过程中需要遵守相关的生物安全规定和操作规程。同时，对于实验结果的分析和解读，也需要结合具体的研究背景和目的进行综合考虑。

NCI-H1975（人肺腺癌细胞)

NCI-H1975（人肺腺癌细胞)培养操作

1)复苏NCI-H1975（人肺腺癌细胞)：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCI-H1975（人肺腺癌细胞)传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NCI-H1975（人肺腺癌细胞)冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NCI-H1975（人肺腺癌细胞)可以用于康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌NCI-H1975细胞株的作用研究

通过将吉非替尼、康莱特注射液以及吉非替尼联合康莱特注射液不同干预处理,作用于T790M基因突变的NCI-H1975（人肺腺癌细胞)吉非替尼耐药细胞株,并检测各处理组的细胞生长抑制情况,各处理组在PI3K/Akt及MAPK/ERK信号通路中Akt和MAPK1(ERK2)基因的表达情况以及相应p-Akt和p-ERK蛋白表达情况,来对康莱特注射液联合吉非替尼对存在T790M突变的NCI-H1975（人肺腺癌细胞)吉非替尼耐药细胞株的作用及其机制进行探索研究。

方法:1体外培养NCI-H1975（人肺腺癌细胞)细胞,选取对数生长期细胞进行实验。实验分为空白对照组,吉非替尼组,康莱特注射液组,吉非替尼联合康莱特注射液组;吉非替尼组设置浓度分别为:0.1μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L,作用时间分别为:24h、48h、72h;康莱特注射液组设置浓度分别为:5μl/ml、10μl/ml、20μl/ml、40μl/ml、80μl/ml、100μl/ml、160μl/ml,作用时间分别为:24h、48h、72h;应用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)法分别测定吉非替尼组和康莱特注射液组的不同浓度、不同作用时间的抑制率绘制生长曲线,并分别计算吉非替尼组30%抑制率所对应浓度(IC30)与康莱特注射液组50%抑制率所对应浓度(IC50)。

2确定联合用药组浓度及作用时间:根据MTT结果,吉非替尼组IC30=25μl/ml,康莱特注射液组IC50=40μl/ml,故联合用药组吉非替尼取25μl/ml,康莱特注射液取40μl/ml,作用时间为48小时,应用MTT法检测定各时间联合用药组的抑制率。

3取对数生长期NCI-H1975（人肺腺癌细胞)细胞,按上述分组进行处理。药物作用48h后提取总RNA,检测总RNA的量、纯度及浓度,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)半定量检测各组细胞内Akt基因和MAPK1(ERK2)基因的m RNA的表达水平。

4选取对数生长期NCI-H1975（人肺腺癌细胞)细胞置入六孔板培养,分组处理同上。药物作用48h后提取总蛋白,检测总蛋白浓度,蛋白质印迹(Western-blot)法检测各组p-Akt与p-ERK蛋白表达情况。

5运用IBM SPSS Statistics 22.0.0.0统计软件对数据进行处理。

结果:1 MTT结果显示:1.1与对照组相比,随着康莱特注射液组浓度增加及作用时间的延长,对人肺腺癌NCI-H1975细胞的抑制率逐渐升高,其抑制作用有剂量及时间依赖效应;吉非替尼单药24h组随药物浓度的升高,在0.1-5μmol/l范围内未见其对NCI-H1975（人肺腺癌细胞)细胞有明显抑制情况,在10-50μmol/l范围内出现对人肺腺癌NCI-H1975细胞生长轻度抑制,在吉非替尼单药48h、72h组对NCI-H1975（人肺腺癌细胞)细胞的抑制率逐渐升高,呈时间、剂量依赖关系。1.2联合用药组:吉非替尼联合康莱特注射液培养48h后,两药联合作用抑制率高于各单药组,有统计学意义(P<0.05)。

参考文献

[1]Emerging Paradigms in the Development of Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors in Lung Cancer[J].Justin F.Gainor;;Alice T.Shaw.Journal of Clinical Oncology,2013(31)

[2]Bypass Mechanisms of Resistance to Receptor Tyrosine Kinase Inhibition in Lung Cancer[J].Matthew J.Niederst;;Jeffrey A.Engelman.Science Signaling,2013(294)

[3]EGFR-Mediated Beclin 1 Phosphorylation in Autophagy Suppression,Tumor Progression,and Tumor Chemoresistance[J].HORTON,JR.ARTHUR MACNEILL;ROBERTS CHARLES.Cell,2013

[4]Activation of the FGF2-FGFR1 Autocrine Pathway:A Novel Mechanism of Acquired Resistance to Gefitinib in NSCLC[J].Hideki Terai;;Kenzo Soejima;;Hiroyuki Yasuda;;Sohei Nakayama;;Junko Hamamoto;;Daisuke Arai;;Kota Ishioka;;Keiko Ohgino;;Shinnosuke Ikemura;;Takashi Sato;;Satoshi Yoda;;Ryosuke Satomi;;Katsuhiko Naoki;;Tomoko Betsuyaku.Molecular Cancer Research,2013(7)

[5]郑悦.康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌NCI-H1975细胞株的作用研究[D].河北医科大学,2016.