T淋巴细胞白血病细胞的应用

背景^[1-3]

C8166（T淋巴细胞白血病细胞）是一种T淋巴细胞白血病细胞系，被广泛用于生物医学研究中。这种细胞系是从一名患有T淋巴细胞白血病的患者的淋巴结中分离出来的，并且经过长期的体外培养而得到的。C8166（T淋巴细胞白血病细胞）细胞具有悬浮生长的特性，可以在含有一定比例的胎牛血清和抗生素的培养基中生长繁殖。

由于C8166（T淋巴细胞白血病细胞）细胞来源于T淋巴细胞白血病，因此这种细胞系具有一些特殊的生物学特性，如可以表达T淋巴细胞的标记分子，对T细胞受体和细胞因子的刺激具有响应等。因此，C8166细胞被广泛用于T淋巴细胞白血病的研究和治疗中，如药物筛选、基因编辑、细胞免疫治疗等研究。

此外，C8166（T淋巴细胞白血病细胞）细胞也被用作实验材料，如细胞培养、细胞传代、细胞冻存等。然而，由于C8166细胞来源于白血病患者，因此在实验过程中需要严格遵守相关的安全操作规程，确保实验人员和环境的安全。

C8166（T淋巴细胞白血病细胞）

C8166（T淋巴细胞白血病细胞）培养操作

1)复苏C8166（T淋巴细胞白血病细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)C8166（T淋巴细胞白血病细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)C8166（T淋巴细胞白血病细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

C8166（T淋巴细胞白血病细胞）可以用于半夏提取物对白血病细胞增殖抑制及凋亡作用机制研究

探索半夏提取物有效成份对白血病细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用,探寻其分子水平的作用的机制;探讨半夏提取物在白血病治疗中可能的应用价值。

研究方法用氯仿低温超声方法提取半夏有效成分,分别制备100,200,300,400,500ug/ml5种浓度,作用于3种K562、HL60和淋巴系白血病细胞C8166（T淋巴细胞白血病细胞）白血病细胞株。观察半夏提取物处理髓系白血病细胞K562、HL60和淋巴系白血病细胞C8166（T淋巴细胞白血病细胞）细胞的形态学改变;CCK-8法检测半夏提取物对K562、HL60和淋巴系白血病细胞C8166的抑制作用;Annexin V/PI双染流式细胞术检测半夏提取物处理对3种白血病细胞凋亡的诱导作用;实时荧光定量PCR检测半夏提取物对3种白血病细胞检测Bax、Bcl-2和Caspase-3基因表达量,免疫印迹检测半夏提取物对K562、HL60和淋巴系白血病细胞C8166相关凋亡蛋白表达的影响。

研究结果1.CCK-8法检测结果显示:半夏提取物处理对K562、HL60和淋巴系白血病细胞C8166（T淋巴细胞白血病细胞）的增殖均有较强的抑制作用,且在500ug/ml浓度下半夏提取物诱导凋亡作用最为稳定。

2. Annexin V/PI双染流式细胞术检测显示:随着半夏提取浓度的增加,K562、HL60和淋巴系白血病细胞C8166（T淋巴细胞白血病细胞）凋亡比率逐渐升高。300ug/ml和500ug/ml作用72h,凋亡率明显高于对照组,表明半夏提取物处理可以诱导3种白血病细胞发生凋亡,提示半夏提取物对白血病细胞增殖的抑制作用可能是由于半夏提取物促进白血病细胞凋亡。

3.实时荧光定量PCR显示:半夏提取物作用3种白血病细胞72h后,与对照组比较明显提高了Bax,Caspase-3 mRNA的表达量,降低了Bcl-2 mRNA的表达量(P<0.05)。4.蛋白免疫印迹显示:半夏提取物作用K562、HL60和淋巴系白血病细胞C816672h后,能上调促凋亡蛋白Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2,同时激活下游信号蛋白Caspase-3表达。

参考文献

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[5]刘伟.半夏提取物对白血病细胞增殖抑制及凋亡作用机制研究[D].昆明理工大学,2022.