半胱天冬酶3兔单克隆抗体

背景^[1-7]

Caspase 3(active)Rabbit Monoclonal Antibody(半胱天冬酶3兔单克隆抗体)是用Caspase 3对兔进行系统免疫再取出脾脏细胞赛选出只分泌单一Caspase 3蛋白的B淋巴细胞，再将此B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行杂交。最后制得分泌单一Caspase 3蛋白和无限增值的杂交细胞。

caspase 3（CASP3）Homo sapiens该基因编码的蛋白质是半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶（caspase）家族的成员。半胱氨酸蛋白酶的顺序激活在细胞凋亡的执行阶段起着重要作用。半胱天冬酶作为无活性酶原存在，其在保守的天冬氨酸残基处经历蛋白水解加工以产生两个亚基，大小不一，二聚化形成活性酶。这种蛋白质切割并激活半胱天冬酶6,7和9，蛋白质本身由半胱天冬酶8,9和10加工。它是淀粉样蛋白-β4A前体蛋白切割中的主要半胱天冬酶，与神经元死亡有关。阿尔茨海默氏病。该基因的可变剪接产生编码相同蛋白质的两种转录物变体。

催化活性：在P1和P4位置严格要求Asp残留。它具有优选的Asp-Xaa-Xaa-Asp-|的切割序列，在P2处具有疏水性氨基酸残基并且在P3处具有亲水性氨基酸残基，尽管在该位置也接受Val或Ala。：由靛红磺酰胺抑制。，功能：参与负责凋亡执行的半胱天冬酶的激活级联反应。在细胞凋亡开始时，它在'216-Asp-|-Gly-217'键处蛋白水解切割聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）。切割并激活碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构域和膜附着结构域之间的固醇调节元件结合蛋白（SREBPs）。裂解并激活caspase-6，-7和-9。涉及亨廷顿蛋白的裂解。，PTM：颗粒酶B，胱天蛋白酶-6的裂解，caspase-8和caspase-10产生两个活性亚基。

应用^[8]

半胱天冬酶3兔单克隆抗体可用于骨癌痛大鼠的镇痛效应研究：

Caspase 3是多数细胞凋亡途径中的末端效应蛋白酶,但其活化需要外源刺激及上游一系列caspase分子级联反应。Srinivasula等通过分子生物学的方法模拟caspase3在细胞内的活化过程,将其大、小亚基序列颠倒后,构建了无需外源刺激或上游caspase分子作用,就可自发活化的人源性重组caspase3基因,直接介导靶细胞凋亡,可作为基因治疗领域一个极好的细胞致死基因。

但人源性基因可能会诱发实验大鼠免疫反应,干扰实验结果的准确性,因此,本研究拟通过构建大鼠源性重组Caspase3基因,并将其与非病毒载体PEI共同定向微注射到胫骨转移癌痛模型大鼠RVM区,启动RVM区神经元自发凋亡,达到“永久”性治疗骨癌痛的效果。

参考文献

[1] Alnemri ES,Livingston DJ,Nicholson DW,Salvesen G,Thornberry NA,Wong WW,Yuan J(October 1996)."Human ICE/CED-3 protease nomenclature".Cell.87(2):171.

[2] Gervais FG,Xu D,Robertson GS,Vaillancourt JP,Zhu Y,Huang J,LeBlanc A,Smith D,Rigby M,Shearman MS,Clarke EE,Zheng H,Van Der Ploeg LH,Ruffolo SC,Thornberry NA,Xanthoudakis S,Zamboni RJ,Roy S,Nicholson DW(April 1999)."Involvement of caspases in proteolytic cleavage of Alzheimer's amyloid-beta precursor protein and amyloidogenic A beta peptide formation".Cell.97(3):395–406.

[3] "Entrez Gene:CASP3 caspase 3,apoptosis-related cysteine peptidase".Harrington HA,Ho KL,Ghosh S,Tung KC(2008)."Construction and analysis of a modular model of caspase activation in apoptosis".Theoretical Biology&Medical Modelling.5(1):26.

[4] Wyllie AH(1997)."Apoptosis:an overview".British Medical Bulletin.53(3):451–65.Perry DK,Smyth MJ,Stennicke HR,Salvesen GS,Duriez P,Poirier GG,Hannun YA(July 1997)."Zinc is a potent inhibitor of the apoptotic protease,caspase-3.A novel target for zinc in the inhibition of apoptosis".The Journal of Biological Chemistry.272(30):18530–3.

[5] Stennicke HR,Renatus M,Meldal M,Salvesen GS(September 2000)."Internally quenched fluorescent peptide substrates disclose the subsite preferences of human caspases 1,3,6,7 and 8".The Biochemical Journal.350(2):563–8.

[6] Salvesen GS(January 2002)."Caspases:opening the boxes and interpreting the arrows".Cell Death and Differentiation.9(1):3–5.

[7] Agniswamy J,Fang B,Weber IT(September 2007)."Plasticity of S2-S4 specificity pockets of executioner caspase-7 revealed by structural and kinetic analysis".The FEBS Journal.274(18):4752–65.

[8] 陈莎莎.重构型自发活化Caspase3基因的构建及其在骨癌痛大鼠的镇痛效应研究[D].华中科技大学,2010.