KYSE-70的应用

背景[1-3]

KYSE-70是一种人食管鳞癌细胞系，来源于一名食管癌患者的肿瘤组织。这种细胞系被广泛用于食管癌的研究，包括发病机制、药物筛选以及治疗方法的研究。

KYSE-70细胞系具有贴壁生长的特性，并且在体外培养条件下能够保持稳定的生长速度和遗传特性。这些细胞可以用于模拟人体食管癌的生物学行为，从而深入了解食管癌的发病机制、肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等过程。

在药物筛选方面，KYSE-70细胞系可以作为药物敏感性实验的模型，用于评估新药物对食管癌细胞的细胞毒性、抗增殖作用或诱导凋亡的能力。通过比较不同药物对KYSE-70细胞的杀伤效果，可以为食管癌的临床治疗提供药物选择和剂量优化的参考依据。

此外，KYSE-70细胞系还可以用于基因治疗和细胞治疗等研究。通过基因转染或细胞融合等技术，可以将特定的基因或细胞引入KYSE-70细胞中，以研究基因功能、信号通路或细胞间相互作用等问题。同时，KYSE-70细胞系也可以作为免疫治疗的靶细胞，用于评估免疫细胞对食管癌细胞的杀伤效果和免疫治疗的疗效。

KYSE-70

KYSE-70细胞培养操作

1)复苏KYSE-70细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)KYSE-70细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)KYSE-70细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

KYSE-70可以用于全反式维甲酸对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移及对Notch1、Dll4、VEGF-C表达的影响

实验在体外实验中观察ATRA通过维甲酸受体β(RAR-β)对食管癌细胞系KYSE70中Notch1、Dll4、VEGF-C蛋白表达的影响,为ATRA在食管癌抗血管、淋巴管生成方面进一步提供理论依据。目的探讨全反式维甲酸及RAR-β激动剂或拮抗剂对食管癌KYSE70细胞系增殖、迁移的影响,及对Notch1、Dll4、VEGF-C蛋白表达的调节,初步探索ATRA对食管癌抗血管和淋巴管生成的可能机制。

方法：将处于对数生长期的KYSE70细胞随机分为4组,分别为:ATRA组、ATRA+CD2314组、ATRA+LE135组和空白对照组,采用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测经不同药物处理后各组食管癌细胞RAR-β蛋白表达情况;采用CCK-8法测定经不同药物处理后各组食管癌细胞的增殖情况及细胞活力的变化;通过划痕实验检测ATRA联合维甲酸受体激动剂或抑制剂分别对KYSE70细胞在0h和24h的细胞迁移能力的影响;采用Western blot法测定不同分组药物分别作用食管癌细胞48h后,Notch1、Dll4和VEGF-C蛋白的表达情况。

结果1.Western blot结果:细胞按实验分组:即ATRA+LE135组(ATRA终浓度为10μmol/L,LE135终浓度为1μmol/L),ATRA组(ATRA终浓度为10μmol/L)及ATRA+CD2314组(ATRA终浓度为10μmol/L,CD2314终浓度为1μmol/L)分别处理48h后,各组RAR-β蛋白相对表达量分别是:(11.33±0.99)×10-2、(28.32±0.93)×10-2及(33.70±0.77)×10-2,对照组为(20.00±0.99)×10-2。经统计学分析,与对照组相比,各实验组的RAR-β蛋白表达量均发生明显变化,均具有统计学差异(p<0.05);实验组之间进行两两比较,差异也具有统计学意义(p<0.05)。

2.CCK-8结果:在作用24h后,各实验组,即ATRA+LE135组、ATRA组及ATRA+CD2314组相对于对照组的增殖抑制率分别为:24.39%、29.04%及36.7%;经过48h后,上述各实验组的增殖抑制率依次是:30.83%、40.29%及50.1%。在72h后,各实验组的细胞增殖抑制率分别是:40.46%、51.5%及62.1%。经统计学分析,各实验组与对照组相比,差异均具有统计学意义(p<0.05),ATRA联合RAR-β激动剂CD2314组与ATRA组相比,对KYSE70细胞的增殖抑制能力增强;ATRA联合RAR-β抑制剂LE135组与ATRA组相比,对KYSE70细胞的增殖抑制能力减弱,且差异均具有统计学意义。

3.细胞划痕实验结果:作用于24h后,各实验组,即ATRA+LE135组、ATRA组及ATRA+CD2314组相对于0h的细胞的迁移率分别为(60.06±1.01)%、(47.17±2.17)%及(32.50±0.89)%。对照组的迁移率为(74.45±0.49)%,各实验组分别与对照组相比,差异均具有统计学意义(p<0.05),各实验组之间进行两两比较,差异也具有统计学意义(p<0.05)。

4.Western blot结果:各实验组:即ATRA+LE135组、ATRA组及ATRA+CD2314组分别作用于KYSE70细胞48h后,Notch1的相对表达量分别是:(52.9±1.24)×10-2、(108.31±1.77)×10-2及(117.60±3.02)×10-2,对照组是(81.36±0.77)×10-2。Dll4蛋白的相对表达量依次是:(47.04±1.44)×10-2、(30.59±0.52)×10-2及(26.51±2.37)×10-2,对照组是(50.37±1.32)×10-2。VEGF-C的相对表达量分别是:(93.12±2.32)×10-2、(53.97±2.09)×10-2及(26.90±2.06)×10-2,对照组是(117.28±3.17)×10-2。经统计学分析,各实验组对比对照组,差异均具有统计学意义(p<0.05),各实验组两两相比,差异均具有统计学意义。

参考文献

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[3]Vasculogenic mimicry:a novel target for glioma therapy[J].Yin-Sheng Chen;Zhong-Ping Chen.Chinese Journal of Cancer,2014(02)

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[5]桑露倩.全反式维甲酸对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移及对Notch1、Dll4、VEGF-C表达的影响[D].郑州大学,2019.