COC1的应用

背景^[1-3]

COC1细胞，也被称为Ovarian Cancer Cell Line 1，是一种人卵巢癌细胞系。这种细胞系通常用于生物医学研究，特别是卵巢癌的研究。COC1细胞具有上皮细胞的特性，并且在体外培养条件下能够保持稳定的生长速度和遗传特性。

由于COC1细胞来源于卵巢癌患者，因此它们常被用作研究卵巢癌发病机制和治疗的模型。这些细胞可以用于模拟卵巢癌在体内的生物学行为，包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移以及对治疗的响应等。

在药物筛选方面，COC1细胞系可用于测试新药物对卵巢癌细胞的细胞毒性、抗增殖作用或诱导凋亡的能力。通过比较不同药物对COC1细胞的杀伤效果，可以为卵巢癌的临床治疗提供药物选择和剂量优化的参考依据。

此外，COC1细胞系还可以用于基因治疗和细胞治疗等研究。通过基因转染或细胞融合等技术，可以研究特定基因在卵巢癌发展中的作用，或者探索新的治疗方法。

COC1

COC1细胞培养操作

1)复苏COC1细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)COC1细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)COC1细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

COC1细胞可以用于MicroRNA在耐药及敏感卵巢癌细胞系中的差异表达及microRNA-30a-5p在卵巢癌耐药中的作用

耐药及敏感卵巢癌细胞系中microrna的差异表达目的:利用基因芯片研究两组卵巢癌细胞系skov3/ddp和skov3,COC1/ddp和COC1中microrna的表达谱,通过检测耐药及敏感卵巢癌细胞系中表达microrna的差异性,为未来相关领域寻找并分析卵巢癌的铂类耐药的治疗靶点给予新的研究方向。

方法:常规培养skov3/ddp和skov3,COC1/ddp和COC1细胞株,trizol法分别抽提总rna,对microrna分别进行cy3和cy5荧光标记,将所选细胞系与包含人类和小鼠的共924条microrna成熟的序列进行杂交,最后进行microrna微阵列芯片杂交检测分析,获得microrna表达谱,利用rt-pcr方法对筛选出的microrna进行可靠性验证,鉴定出与卵巢癌耐药相关的microrna。

结果:1rna的质量检测:从skov3/ddp和skov3,COC1/ddp和COC1细胞株提取出的总rna浓度值依次为:0.61、0.78、1.38及1.53(单位为μg/μl),a260/a280比值均处于1.92.0范围内,琼脂糖凝胶电泳实验的结果显示,清晰的条带包括18s及28s,其亮度比大概等于1:2,提取的总rna纯度符合研究要求,未发生显著的降解。2microrna芯片测定结果:本研究经过cy3及cy5荧光颜色标记、纯化、基因芯片杂交、图像采集、数据进行归一化处理后,分别以两种细胞cy3、cy5荧光标记信号强度的比值为标准来判定差异表达的microrna。

结果显示:其中skov3/dppvsskov3细胞系中hsa-mir-99a-5p,hsa-mir-30a-5p,hsa-mir-34c-5p,hsa-mir-31-3p,hsa-mir-181d等19个micrornas高表达,hsa-mir-96-5p,hsa-mir-200c-3p,hsa-mir-193b-3p等20个micrornas低表达。COC1/dppvsCOC1细胞系中hsa-mir-34a-5p,hsa-mir-30a-5p,hsa-mir-181c-3p等22个micrornas高表达,hsa-mir-892b,hsa-mir-505-5p等24个micrornas低表达。其中hsa-mir-30a-5p,hsa-mir-181在两种耐药卵巢癌细胞系中均表达升高。结论:在耐药及敏感卵巢癌细胞系skov3/ddp和skov3,COC1/ddp和COC1中microrna的表达谱存在明显差异。在所有差异表达的micrornas中,hsa-mir-30a-5p,hsa-mir-181在两种化疗耐药卵巢癌细胞系中表达水平均高于敏感细胞系,推测二者可能是在microrna水平与卵巢癌化疗耐药相关的指标,而且利用rt-pcr方法对mir-30a-5p,hsa-mir-181在两种化疗耐药卵巢癌细胞系中进行可靠性验证,与基因芯片的结果一致,且以mir-30a-5p升高最为显著。

参考文献

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[3]Micro RNA‐mediated regulation of melanoma[J].V.Sun;;W.B.Zhou;;S.Majid;;M.Kashani‐Sabet;;A.A.Dar.Br J Dermatol,2014(2)

[4]MicroRNA Expression Patterns Related to Merkel Cell Polyomavirus Infection in Human Merkel Cell Carcinoma[J].Hong Xie;;Linkiat Lee;;Stefano Caramuta;;Anders Höög;;Nanna Browaldh;;Viveca Björnhagen;;Catharina Larsson;;Weng-Onn Lui.Journal of Investigative Dermatology,2014

[5]刘金.MicroRNA在耐药及敏感卵巢癌细胞系中的差异表达及microRNA-30a-5p在卵巢癌耐药中的作用[D].河北医科大学,2017.