棕榈酰六肽-12的合成方法

发布日期:2024/2/18 8:57:02

背景技术

棕榈酰六肽-12，亦称为脂肽，是一种化妆品活性成分，主要用于高端美容抗皱产品。其氨基酸序列结构为Palmitoyl-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OH。在肽化学的早期发展阶段，肽合成反应一般都是在液相中进行的。遗憾的是，液相合成多肽很费力，并且需要具备在选择保护基和缩合方法上的策略和战略以及解决溶解性问题等诸多方面的知识。固相多肽合成方法自1963年由Merrifield提出以来，由于合成方便、迅速，成为多肽合成的首选方法。固相合成的优点主要表现在最初的反应物和产物都是连接在固相载体上，因此可以在一个反应容器中进行所有的反应，便于自动化操作，加入过量的反应物可以获得高产率的产物，同时产物很容易分离。但是，固相合成方法也有很多自身难以克服的限制：要求使用过量的氨基酸及偶联试剂以保证缩合反应完成，因而原子经济性极差；需要消耗大量的有机溶剂洗涤树脂；反应为非均相体系，难于监测和分析反映进程，并受实验误差的干扰；增长中的肽链聚集现象增加了合成的难度。

棕榈酰六肽-12

连续流微通道反应是近年来发展起来的绿色有机合成方法。微反应器的两大特征即比表面积大及连续操作方式，使得我们对反应工艺的精确控制成为可能。相对于传统的间歇反应工艺，微反应器具有高速混合、高效传热、反应物停留时间窄、重复性好、几乎无放大效应、便于实时监测反应进程、在线化学品量少从而达到高安全性能等优势。目前，连续流微通道反应器在有机小分子的合成中取得了很多应用，但应用于多肽合成的案例还很少见，本文将介绍一种利用微通道模块化反应装置合成棕榈酰六肽-12的方法。

合成方法

a.Boc-Pro-Gly-OBzl的制备过程

配制物料1：将Boc-Pro-OH(5g,23.22mmol)、EDC•HCl(5.34g,27.87mmol)以及HOBt（3.765g,27.87mmol）溶于250ml二氯甲烷中,Boc-Pro-OH的浓度为0.09289mmol/ml；

配制物料2：将H-G1y-OBzl•HCl(4.075g,19.35mmol)和DIEA(1.000g,38.7mmol)溶于250ml二氯甲烷中，H-Gly-OBzl的浓度为0.0774mmol/ml。物料1与物料2的进料流速通过计量泵来调节，流速相等为2ml/min。缩合反应在第一微结构反应器中进行，反应时间10min,温度30℃,得到二肽Boc-Pro-Gly-OBzl。

b.Boc-Pro-G1y-OBzl洗涤的过程

物料3:10wt%Na2CO3水溶液。

物料3的进料流速为5ml/min，通过计量泵来调节，在第二微结构反应器中进行洗涤，洗涤10min，用分液漏斗在出料口接液，静置分层，用HPLC监测有机相是否洗涤除杂感觉，若还有杂质可再洗涤一轮。

c.Boc-Pro-Gly-OBzl脱Boc保护的过程

将洗涤后的二肽Boc-Pro-Gly-OBzl（物料4）与TFA（物料5）通过计量泵调节流速分别为4ml/min、lml/min，10min的时间在第三微结构反应器中脱除Boc，得到H-Pro-Gly-OBzl。

d.脱保护后的后处理过程

在出料口用烧杯收集脱Boc后的反应液，用10wt%Na2CO3水溶液中和TFA，放出大量的CO2气体，直至无气体放出，静置分层，保留有机层，HPLC监测脱除效果。

e.通过微通道模块化反应装置，类似于a～d处理方式依次偶联上Boc-Ala-OH、Boc-Val-OH、Boc-Gly-OH以及Boc-Val-OH，每偶联一个氨基酸之后都要进行洗涤、脱保护以及后处理的过程。配制Boc-Ala-OH、Boc-Val-OH以及Boc-Gly-OH的活化液的浓度均是0.09289mmol/ml，溶剂二氯甲烷均控制在250ml，得到H-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OBzl。

f.Polmitoyl-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OBzl的制备过程

配制物料6：将棕榈酸（4.963g，19.35mmol），浓度为0.0774mmol/ml，与物料7(H-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OBzl)通过计量泵等流速2ml/min进入第一微结构反应器中进行偶联反应，反应时间10min，温度30℃。

g.Polmitoyl-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OBzl的洗涤过程参考b洗涤的过程。

h.Polmitoyl-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OBzl的脱Bzl保护过程

脱保护的方式为钯碳加氢氢解，选用4.118g5%钯碳加氢催化剂，30℃下加氢反应2h。

i.棕榈酰六肽-12制备纯化的过程

色谱条件为，流动相分别选用A为0.1%v/v AcOH/H2O和B为0.1%v/vAcOH/MeCN，制备柱选用C18,20mmID×250mm，设置制备梯度为0min-5min-125min-140min的时间对应B%含量为5%-20%-60%-95%，B%含量的增长过程为线性增长。得到棕榈酰六肽-12总收率62.7%，纯度99%。