HPLC法测定L-氢化乳清酸中异构体的含量

背景技术

近年来，在药物研发市场，大分子生物药所受到的关注度越来越高。包括多肽、蛋白质、抗体、聚糖与核酸等在内的大分子生物药物多用于治疗肿瘤、艾滋病、心脑血管病、肝炎等重大疾病.其中的多肽药物，因具有合成工艺成熟、纯度高、稳定性较好及副作用小等优势，已被广泛应用于多种治疗领域。氢化乳清酸是合成多肽药物中用到的关键物料，它有两种构型，分别为L-氢化乳清酸和D-氢化乳清酸。本文建立了新的高效液相色谱法用于测定L-氢化乳清酸中异构体的含量，该方法可有效地分离两种构型的氢化乳清酸并进行异构体的含量测定，为优化合成工艺、制定杂质控制策略及提高样品纯度提供支持依据。

检测方法

1、色谱条件

色谱柱为CHIRALPAKQD-AX（4.6mm×150mm，5pm），流动相为甲醇-乙腈-乙酸-三乙胺（体积比50：50：2：0.2），流速为0.5mL/min，检测波长为245nm，柱温25℃，进样量为50uL。

2、溶液配制

分别取L-氢化乳清酸与D-氢化乳清酸各适量，加甲醇-水(体积比为1：1)超声溶解，并稀释制成每1mL中分别约含L-氢化乳清酸2mg与D-氢化乳清酸6ug的混合溶液，作为供试品溶液。

3、专属性

取供试品溶液50uL注入液相色谱仪，记录色谱图，专属性测定结果显示，L-氢化乳清酸与D-氢化乳清酸能达到良好分离，分离度3.0。

4、检测限

称取D-氢化乳清酸适量，用溶剂逐步稀释至一定浓度并进样检测，以信噪比(S/N)约为3时的质量浓度作为检测限质量浓度，实验结果显示，本品的检测限为0.7μg/mL。

5、重复性

按照“实验方法”项供试品溶液的配制方法，平行配制6份溶液，考察方法的重复性，测定结果显示供试品溶液中D型异构体含量的相对标准偏差RSD（n=6）为6.9%，方法重复性良好。

6、耐用性

分别调整流速、柱温、流动相比例，取供试品溶液分别进样，记录色谱图.实验结果显示，D-氢化乳清酸和L-氢化乳清酸的分离度均大于1.5。由此确认当测定条件有微小变动时，异构体分离不受影响。

7、溶液稳定性

取D-氢化乳清酸和L-氢化乳清酸适量，按照供试品溶液的配制方法配制溶液，并按“实验方法”项所述色谱条件，于25℃分别在第0，2，6，10，14，18，22，24h进样，稳定性实验结果显示，待测溶液室温放置24h，D型异构体质量分数的相对标准偏差RSD（n=8）为2.2%，表明待测溶液室温放置24h内稳定。

参考文献

[1]李音卓,江竹莲,徐翠玲,等. HPLC法测定L-氢化乳清酸中异构体的含量[J]. 淮海工学院学报（自然科学版）,2017,26(4):31-33. DOI:10.3969/j.issn.1672-6685.2017.04.008.