LIM1215 人结直肠癌细胞系的应用

背景^[1-3]

LIM1215人结直肠癌细胞系是一种来源于人结直肠癌的细胞系，常用于研究结直肠癌的生物学特性、药物筛选和治疗策略。该细胞系具有以下特点：

来源：LIM1215人结直肠癌细胞系来源于人结直肠癌组织，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。

形态特征：LIM1215人结直肠癌细胞系呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。

生长特性：LIM1215人结直肠癌细胞系生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中稳定生长。

侵袭转移特性：LIM1215人结直肠癌细胞系具有较强的侵袭和转移能力，可通过Transwell小室实验等方法检测其侵袭和转移能力。

其他特性：LIM1215人结直肠癌细胞系还具有一定的增殖能力，可用作研究结直肠癌细胞增殖相关疾病的模型。

LIM1215人结直肠癌细胞系

LIM1215人结直肠癌细胞系培养操作

1)复苏LIM1215人结直肠癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)LIM1215人结直肠癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)LIM1215人结直肠癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

LIM1215人结直肠癌细胞系可以用于Lin28B-Let-7调控环路影响结肠癌化疗敏感性的实验研究

明确Lin28B-Let-7在结肠癌中的调控关系，并阐明其对结肠癌细胞化疗敏感性的影响，从而有助于对逆转结肠癌耐药性关键靶点的研究。目的：1、在8种人结肠癌细胞系（结肠癌细胞系HCT116、SW620、SW1116、SW480、LOVO、LIM1215人结直肠癌细胞系、LS174T和DLD1）中检测Lin28B的表达，并在人结肠癌组织中的检测其表达情况，进而对其定位表达进行观察；2、在过表达Lin28B的结肠癌细胞中证实Lin28B-Let-7调控环路的存在；3、过表达Lin28B/Let-7，观察其对化疗药物5-FU敏感性的变化。

材料与方法：1、对8种人结肠癌细胞系进行PCR检测，观察Lin28B表达情况；Real-time PCR，Western Blot及免疫组化技术对解放军总医院海南分院21例结肠癌和19例正常结肠组织进行检测，观察Lin28B表达情况；2、在人结肠癌细胞系中分别采用免疫荧光法、核浆蛋白分离后行Western Blot和表达GFP慢病毒载体感染的方法检测Lin28B的表达定位。在人结肠癌组织中进行免疫组化染色以进一步确认定位观察；3、在人结肠癌细胞系中，分别过表达Lin28B后观察Let-7的表达情况；反之，过表达Let-7观察Lin28B是否受到抑制；最后，检测过表达Let-7或Lin28B对化疗药物5-FU敏感性的影响。

结果：在结肠癌细胞系HCT116、SW620、SW1116、SW480、LOVO、LIM1215人结直肠癌细胞系、LS174T和DLD1以及结肠癌组织中均发现Lin28B有着广泛的表达，且在结肠癌组织中的表达明显高于正常的结肠组织。继而，Lin28B的定位表达的实验结果观察到其在LIM1215人结直肠癌细胞系细胞核和细胞浆中均有表达，且在细胞浆中呈现高表达。随后，通过Real-time PCR和Western Blot的结果验证了Lin28B-Let-7调控环路的存在。最后，药敏试验结果显示过表达Let-7的结肠癌细胞对5-FU化疗药物的敏感性增加，而过表达Lin28B的结肠癌细胞对5-FU化疗药物的敏感性降低。

参考文献

[1]Induction of the RNA Regulator LIN28A Is Required for the Growth and Pathogenesis of RESTless Breast Tumors[J].Kearney T.W.Gunsalus;;Matthew P.Wagoner;;Kassondra Meyer;;Wyatt B.Potter;;Barry Schoenike;;Soyoung Kim;;Caroline M.Alexander;;Andreas Friedl;;Avtar Roopra.Cancer Research,2012(13)

[2]Lin28A and Lin28B Inhibit let-7 MicroRNA Biogenesis by Distinct Mechanisms[J].Elena Piskounova;;Christos Polytarchou;;James E.Thornton;;Robert J.LaPierre;;Charalabos Pothoulakis;;John P.Hagan;;Dimitrios Iliopoulos;;Richard I.Gregory.Cell,2011(5)

[3]Molecular Basis for Interaction of let-7 MicroRNAs with Lin28[J].Yunsun Nam;;Casandra Chen;;Richard I.Gregory;;James J.Chou;;Piotr Sliz.Cell,2011(5)

[4]Immunotherapy targeting colon cancer stem cells[J].Flora Iovino;;Serena Meraviglia;;Marisa Spina;;Valentina Orlando;;Vitanna Saladino;;Francesco Dieli;;Giorgio Stassi;;Matilde Todaro.Immunotherapy,2011(1)

[5]宁宁.Lin28B-Let-7调控环路影响结肠癌化疗敏感性的实验研究[D].中国人民解放军医学院,2015.