RL95-2 人子宫内膜癌细胞的应用

背景^[1-3]

RL95-2人子宫内膜癌细胞是一种人源性肿瘤细胞系，来源于子宫内膜癌患者的组织样本。这种细胞系在实验室中广泛用于研究子宫内膜癌的生物学特性、药物筛选和治疗策略的开发。

RL95-2人子宫内膜癌细胞具有以下特点：

形态特征：RL95-2人子宫内膜癌细胞呈多边形或长方形，具有丰富的胞质和较大的核。

生长特性：RL95-2人子宫内膜癌细胞在体外培养条件下生长迅速，具有较高的增殖能力。

遗传特征：RL95-2人子宫内膜癌细胞具有人类染色体的正常核型，但可能存在某些基因突变或表达异常。

药物敏感性：RL95-2人子宫内膜癌细胞对多种化疗药物(如顺铂、紫杉醇等)具有敏感性，可作为药物筛选的模型细胞。

研究应用：RL95-2人子宫内膜癌细胞广泛应用于子宫内膜癌的基础研究，包括肿瘤发生机制、分子靶点研究、药物筛选和治疗策略评估等。

虽然RL95-2人子宫内膜癌细胞具有一定的代表性，但仍存在局限性。因此，在进行实验研究时，应结合其他来源的细胞系和动物模型，以获得更全面的研究结果。

RL95-2人子宫内膜癌细胞

RL95-2人子宫内膜癌细胞培养操作

1)复苏RL95-2人子宫内膜癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)RL95-2人子宫内膜癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)RL95-2人子宫内膜癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

RL95-2人子宫内膜癌细胞可以用于短发夹状RNA干扰对子宫内膜癌细胞中HMGB1基因表达及细胞增殖的影响

研究短发夹状RNA(shRNA)干扰对RL95-2人子宫内膜癌细胞中HMGB1基因表达及细胞增殖的影响。

方法:观察由HMGB1基因的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo介导的HMGB1shRNA对RL95-2人子宫内膜癌细胞增殖的影响,将HMGB1基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-shRNA转染人子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中。

实验分组如下:①实验组(RL95-2 HMGB1/p-shRNA)②空载体对照组(RL95-2/p)③转染试剂对照组(RL95-2/mock-contr01)④阳性对照组(RL95-2GAPDH/p-shRNA)⑤阴性对照组(RL95-2 HMGB1/p-NC)⑥空白组(RL95-2人子宫内膜癌细胞)。用实时荧光定量RT-PCR检测转染重组质粒后各组细胞的HMGB1mRNA的表达效应,Western-blot法检测转染重组质粒后各组细胞的HMGB1蛋白水平的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染重组质粒后各组细胞的增殖状况,每组重复试验5次,取3次结果计算,以均数±标准差表示。

结果:(1)重组质粒pGPU6-HMGB1shRNA核酸序列分析结果显示,靶向HMGB1基因的shRNA模板片段已经插入到RNAi专用的pGPU6/GFP/Neo Express质粒中,测序结果与设计完全一致。

(2)重组质粒转染后可见绿色荧光蛋白表达示转染成功,且观察到转染率最高可达到(73.267±1.626)%。

(3)RT-PCR:将HMGB1 pGPU6-shRNA转染RL95-2人子宫内膜癌细胞后2d,实验组的HMGB1mRNA表达量是空白组的0.05倍,差异有统计学意义(2-ΔΔCt＜0.5),实验组和阳性对照组比较差异无统计学意义,空载体对照组、转染试剂对照组、阴性对照组和空白组两两相比较差异均无统计学意义。

(4)Western-blot法:将HMGB1pGPU6-shRNA转染RL95-2人子宫内膜癌细胞后2d,实验组的HMGB1蛋白相对表达量为0.153±0.004,与空白组的0.568±0.005相比较,差异有统计学意义(p＜0.05);与阳性对照组的0.158±0.006相比较,差异无统计学意义;空载体对照组、转染试剂对照组、阴性对照组和空白组两两相比较,差异均无统计学意义。

参考文献

[1]Essential roles of high-mobility group box 1 in the development of murine colitis and colitis-associated cancer[J].Shin Maeda;;Yohko Hikiba;;Wataru Shibata;;Tomoya Ohmae;;Ayako Yanai;;Keiji Ogura;;Shingo Yamada;;Masao Omata.Biochemical and Biophysical Research Communications,2007(2)

[2]Innate Immunity and Protective Neuroinflammation:New Emphasis on the Role of Neuroimmune Regulatory Proteins[J].M.Griffiths;;J.W.Neal;;P.Gasque.International Review of Neurobiology,2007

[3]Increased expression of high mobility group A proteins in lung cancer[J].VKSarhadi;HWikman;KSalmenkivi;EKuosma;TSioris;JSalo;AKarjalainen;SKnuutila;SAnttila.J.Pathol.,2006(2)

[4]Endometrial cancer[J].Frederic Amant;;Philippe Moerman;;Patrick Neven;;Dirk Timmerman;;Erik Van Limbergen;;Ignace Vergote.The Lancet,2005(9484)

[5]李芳.短发夹状RNA干扰对子宫内膜癌细胞中HMGB1基因表达及细胞增殖的影响[D].中南大学,2010.