油红O染色液(细胞专用)的应用

背景^[1-3]

油红O染色液(细胞专用)（Oil Red O staining solution）是一种用于细胞和组织中脂质沉积的特异性染色方法。它主要用于检测脂肪滴、脂蛋白和其他含脂质的结构。在病理学和细胞生物学研究中，油红O染色被广泛应用于评估细胞中的脂肪含量，特别是在研究动脉粥样硬化、脂肪细胞分化和脂肪肝等疾病时。

油红O染色液(细胞专用)

油红O染色液(细胞专用)通常包含油红O染料、异丙醇和水。染色过程通常包括以下步骤：

固定：首先，需要将细胞或组织样本固定在载玻片上，以保持其结构并防止样品在染色过程中脱落。

染色：将油红O染色液加到固定的细胞或组织样本上，使其充分覆盖。染色时间可能因样本类型和所需染色强度而异。

分化：使用60%的异丙醇或其他适当的溶液冲洗掉多余的染料，以便更清晰地观察染色结果。

核染色：为了增强对比度，可以使用苏木精或其他核染料对细胞核进行染色。

封片：最后，将盖玻片放在染色后的样本上，并用封片剂固定。

在使用油红O染色液时，需要注意以下几点：

油红O染色液(细胞专用)应在通风良好的环境中使用，并避免直接接触皮肤和眼睛。

染色液的制备和使用应严格按照制造商的说明进行。

染色时间和分化时间可能需要根据实验目的和样本类型进行调整。

油红O染色的结果可以在光学显微镜下观察，脂肪滴会呈现为红色或橙红色的颗粒。通过定量分析染色强度，可以对细胞中的脂肪含量进行估算。

应用^[4][5]

油红O染色液(细胞专用)可以用于糖肾方基于FXR通路调节脂代谢“肝肾同治”的作用机制研究

糖肾方对db/db小鼠核受体FXR通路介导肾脏脂质沉积的调控机制研究。在实验一的基础上,取正常对照组db/m、模型对照组db/db、糖肾方治疗组的小鼠肾脏皮质。利用酶标比色法测定肾组织胆固醇以及甘油三酯水平。利用Filipin染色及油红O染色液(细胞专用)染色,观察糖肾方对db/db小鼠肾脏脂质沉积的影响。利用Western Blotting,real-time PCR,免疫荧光等方法观察糖肾方对小鼠肾脏皮质FXR,FXR下游靶基因载脂蛋白E(apolipoprotein e,ApoE),以及FXR上游过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)蛋白以及mRNA表达水平的影响。

实验三:糖肾方对肾小管上皮细胞核受体FXR通路介导脂质沉积的调控研究。利用棕榈酸钠刺激体外培养的肾小管上皮细胞(mTECs)模型,CCK8法检测不同浓度糖肾方对mTECs细胞生长抑制率,筛选糖肾方有效浓度。使用Fillibin染色、油红O染色液(细胞专用)染色以及酶标比色法测定糖肾方干预后mTECs细胞内的胆固醇及甘油三酯含量变化,从而评估糖肾方对mTECs细胞脂质沉积的影响。利用Western Blotting,real-time PCR等检测糖肾方对PA刺激mTECs细胞内ApoE,FXR,PGC-1α蛋白以及mRNA表达水平影响。糖肾方干预FXR-SiRNA转染的mTECs细胞,探讨糖肾方通过核受体FXR调节mTECs细胞脂代谢的分子机制。

糖肾方通过核受体FXR通路调节肝脏脂代谢机制研究。

(1) 实验一:糖肾方对自发性2型糖尿病db/db小鼠肝损害的药效学观察。给予8周龄,雄性db/db小鼠以及同遗传背景db/m小鼠适应性喂养2周后,随机分为正常对照组db/m,模型对照组db/db,糖肾方治疗组:db/db+TSF(2.4 g/kg/d),阳性药非诺贝特治疗组:db/db+Fen(30mg/kg/d)。10周龄开始灌胃给药,每周记录动物体重1次,每三周尾尖采血测空腹血糖。给药12周后在麻醉下心脏穿刺法取血,测定肝功能,血脂及血糖水平。同时,处死动物取肝组织,做生化、分子生物学及组织病理检测,评估药物对肝损伤的改善作用。

(2) 实验二:糖肾方对db/db小鼠核受体FXR通路介导肝脏脂质沉积的调控机制研究。在上一实验的基础上,取正常对照组db/m、模型对照组db/db、糖肾方治疗组的小鼠肝组织,进行Filipin染色及油红O染色液(细胞专用)染色,观察糖肾方对db/db小鼠肝脏胆固醇及甘油三酯代谢影响。利用Western Blotting,real-time PCR等检测糖肾方对各组小鼠肝脏FXR,FXR下游靶基因ApoE,以及FXR上游转录共激活因子PGC-1α蛋白以及mRNA表达水平影响。

(3)实验三:糖肾方对小鼠肝细胞核受体FXR通路介导脂质沉积的调控研究。给予棕榈酸钠刺激体外培养的小鼠源正常肝细胞(AML12)模型Fillibin染色和油红O染色液(细胞专用)染色,测定糖肾方干预后AML12细胞内的胆固醇及甘油三酯含量变化,从而评估糖肾方对AML12细胞脂质沉积的影响。

参考文献

[1]Carbohydrate and protein based biopolymeric nanoparticles:Current status and biotechnological applications[J].Madan L.Verma;;B.S.Dhanya;;Sukriti;;Varsha Rani;;Meenu Thakur;;J.Jeslin;;Rekha Kushwaha.International Journal of Biological Macromolecules,2020

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[4]Role of farnesoid X receptor in hepatic steatosis in nonalcoholic fatty liver disease[J].Yingfei Xi;;Hongshan Li.Biomedicine&Pharmacotherapy,2020

[5]申正日.糖肾方基于FXR通路调节脂代谢“肝肾同治”的作用机制研究[D].北京中医药大学,2022.