脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒是一种用于检测脑膜炎黄杆菌的分子诊断试剂盒。该试剂盒基于聚合酶链式反应（PCR）技术，通过特定的引物扩增脑膜炎黄杆菌的DNA片段，从而实现对该病原体的快速、准确检测。

脑膜炎黄杆菌(Neisseria meningitidis)是一种革兰氏阴性菌，是引起脑膜炎和败血症等严重感染的主要病原体之一。PCR(聚合酶链反应)是一种常用的分子生物学技术，可以快速、准确地检测和鉴定脑膜炎黄杆菌的存在。

脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒是一种专门用于检测脑膜炎黄杆菌的PCR试剂盒。它通常包含以下成分：

PCR缓冲液：提供反应所需的pH值和离子浓度。

dNTPs:提供合成DNA的原料。

Taq DNA聚合酶：用于扩增DNA的酶。

引物：特异性地结合到目标基因上的短片段，用于引导PCR反应。

MgCl2:稳定Taq DNA聚合酶的活性。

荧光探针或溴乙啶：用于检测PCR产物。

使用脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒时，首先需要提取待测细菌的DNA，然后将提取的DNA与引物混合，加入PCR反应体系中进行扩增。PCR反应结束后，将产物进行电泳分离，根据产物的大小和数量来判断是否存在脑膜炎黄杆菌基因。

需要注意的是，脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒只能检测到脑膜炎黄杆菌基因的存在，不能确定具体的菌株。如果需要鉴定具体的菌株，需要使用特异性引物进行PCR扩增。

脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒

脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在脑膜炎黄杆菌的感染。

应用^[4][5]

脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒可以用于细菌产金属β-内酰胺酶的检测方法及耐药性研究

探讨并建立在临床微生物实验室可用于常规过筛检测金属β内酰胺酶的方法,并对阳性菌株的耐药性加以分析,为临床合理选择抗生素提供确切的依据。

方法收集全自动微生物分析仪分离的液体稀释法鉴定为耐亚胺培南革兰阴性杆菌58株,首先采用纸片扩散法(即K-B法)及脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒,用亚胺培南(IMP)和头孢他啶(CAZ)纸片筛出耐药菌株;然后以EDTA、CuCl2、FeCl2、2—MPA、MPA为酶抑制剂,头孢他啶、亚胺培南为底物,在M—H平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感性检测;另外对IMP耐药株用EDTA/IMP复合纸片和脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒,即EDTA增效法来检测MBL。阳性菌株用K-B法检测其对12种抗生素的敏感性。

脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒结果(1)对58株入选菌株用两种底物的纸片筛选,脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒结果检出CAZ耐药27株,IMP耐药42株。二者都耐药的有24株;二者都敏感的有13株;IMP耐药、CAZ敏感的有18株;CAZ耐药、IMP敏感的有3株。(2)42株耐IMP的革兰阴性杆菌,用IMP与抑制剂协同共检出17株产M-B-L阳性菌。其中嗜麦芽寡养单胞菌9株,铜绿假单胞菌2株(PA1,PA661),脑膜炎败血黄杆菌3株,假产碱假单胞菌1株,粘金黄杆菌2株。脑膜炎黄杆菌PCR试剂盒总阳性率40.5%(17/42),PA的阳性率为9.1%(2/22)。(3)27株耐CAZ的革兰阴性杆菌,用CAZ与抑制剂协同共检出4株产M-B-L阳性菌。其中嗜麦芽寡养单胞菌2株,铜绿假单胞菌2株(PA1,PA661)。总阳性率14.8%(4/27),PA的阳性率为13.3%(2/15)。

参考文献

[1]Technology and applications of protein microarrays[J].R.Krska;;M.Janotta.Analytical and Bioanalytical Chemistry,2004(3)

[2]Protein microarrays:new tools for pharmaceutical development[J].K.D.Kumble.Analytical and Bioanalytical Chemistry,2003(5)

[3]Direct PCR assay for detection of Neisseria meningitidis in human cerebrospinal fluid[J].H.A.Abdel-Salam.Folia Microbiologica,1999(6)

[4]Human T-and B-cell epitopes of E1 glycoprotein of rubella virus[J].Helena Chaye;;Dawei Ou;;Pele Chong;;Shirley Gillam.Journal of Clinical Immunology,1993(2)

[5]杨佰侠.细菌产金属β-内酰胺酶的检测方法及耐药性研究[D].安徽医科大学,2005.