CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系是一种常用的细胞模型，用于研究肝星形细胞的生物学特性和药物筛选等。以下是对CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系的简介：

细胞来源：CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系来源于鼠的肝星形细胞。

细胞形态：CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系呈贴壁生长状态，具有典型的星形细胞形态。

功能与特点：CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系具有肝星形细胞的典型生物学特征，包括特定的基因表达和功能活性等。该细胞系可用于研究肝星形细胞的生物学行为，如增殖、分化、凋亡和自噬等，以及药物筛选和药效评价等。

培养条件：CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系需要在特定的培养条件下进行培养，包括适宜的气相、温度、培养基和传代方法等。

应用领域：CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系被广泛应用于肝星形细胞的研究，包括肝星形细胞的机制探讨、靶点发现、药物筛选和药效评价等。同时，它也是生物信息学和系统生物学中常用的数据集之一。

CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系

CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系培养操作

1)复苏CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系可以用于黄连素对CCl4诱导的小鼠慢性肝损伤保护作用研究

选用CCl4诱导的小鼠慢性肝损伤以及CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系两种模型，揭示黄连素对肝损伤的保护作用；以AMPK为靶点从氧化应激的角度探讨黄连素发挥保护肝脏作用的分子机制，为其作为抗肝损伤药物的研发提供理论依据。

方法：通过检测血清学指标如ALT、AST、ALP的活性，肝组织中SOD、MDA的活性，组织病理学变化；Western Blot方法检测AMPK、NOX4、Akt、TGF-β1、α-SMA的蛋白表达水平；SRB比色法测定黄连素对CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系增殖的抑制；ELISA法测ROS的表达；初步探索黄连素对肝损伤的保护作用机制。

结果：1．黄连素抑制CCl4诱导的肝损伤：黄连素可以明显降低血清中ALT、AST、ALP水平，HE染色及免疫组化染色显示黄连素可明显改善CCl4引起的病理组织学改变。

2、黄连素对肝损伤小鼠肝组织中SOD、MDA的影响：黄连素可以明显降低小鼠肝组织中MDA水平，增加SOD水平，提高了机体抗氧化能力。

3．黄连素对CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系增殖的抑制作用：黄连素对CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系增殖的抑制作用随着时间延长及药物浓度的增加而增强，黄连素作用24h且浓度≥12.5μmol/L时即可表现出明显的抑制细胞增殖的作用（P<0.01）。

4．黄连素对CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系细胞ROS水平的影响：黄连素可以明显抑制胞内ROS的产生（P<0.05）。

5．黄连素对相关蛋白表达的影响：黄连素抑制肝组织中NOX4、p-Akt、TGF-β1的表达，增加p-AMPK的表达，与CCl4组相比差异显著；黄连素可显著降低CFSC-2G鼠肝星形贴壁细胞系的α-SMA、p-Akt的表达，p-AMPK的表达明显增加。

结论：黄连素对CCl4诱导的小鼠慢性肝损伤有保护作用，能抑制肝星形细胞的增殖和激活。黄连素的保肝作用可能通过激活AMPK，阻断NOX信号通路实现的。

参考文献

[1]TGF-βregulates Nox4,MnSOD and catalase expression,and IL-6 release in airway smooth muscle cells.[J].Michaeloudes Charalambos;;Sukkar Maria B;;Khorasani Nadia M;;Bhavsar Pankaj K;;Chung Kian Fan.American journal of physiology.Lung cellular and molecular physiology,2011(2)

[2]AMPKα2 Deletion Causes Aberrant Expression and Activation of NAD(P)H Oxidase and Consequent Endothelial Dysfunction In Vivo:Role of 26S Proteasomes[J].Shuangxi Wang;;Miao Zhang;;Bin Liang;;Jian Xu;;Zhonglin Xie;;Chao Liu;;Benoit Viollet;;Daoguang Yan;;Ming-Hui Zou.Circulation Research,2010(6)

[3]Regulation of cell proliferation by NADPH oxidase-mediated signaling:Potential roles in tissue repair,regenerative medicine and tissue engineering[J].Elsa C.Chan;;Fan Jiang;;Hitesh M.Peshavariya;;Gregory J.Dusting.Pharmacology and Therapeutics,2009(2)

[4]AMP-activated protein kinase in the regulation of hepatic energy metabolism:from physiology to therapeutic perspectives.[J].Viollet B;;Guigas B;;Leclerc J;;Hébrard S;;Lantier L;;Mounier R;;Andreelli F;;Foretz M.Acta physiologica(Oxford,England),2009

[5]王云晶.黄连素对CCl4诱导的小鼠慢性肝损伤保护作用研究[D].吉林大学,2012.