MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞的应用

背景^[1-3]

MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞是一种来源于人类多发性骨髓瘤的细胞系。多发性骨髓瘤是一种恶性血液肿瘤，主要影响骨髓和骨骼系统。MOLP-8细胞系是通过将人类多发性骨髓瘤细胞与小鼠的肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)进行基因重组而产生的。

MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞在实验室研究中被广泛用于研究多发性骨髓瘤的生物学特性、发病机制以及抗肿瘤药物的筛选。此外，MOLP-8细胞系还可以用于研究肿瘤免疫治疗、基因治疗和生物标记物等领域。

MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞的优点是易于培养、生长迅速且具有较高的生物活性。然而，由于其来源于人类多发性骨髓瘤，因此在某些研究中可能存在伦理问题。此外，MOLP-8细胞系的生物学特性可能因实验室条件和操作方法的不同而有所差异。因此，在进行实验研究时，需要对实验条件进行严格控制以确保结果的可靠性。

MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞

MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞培养操作

1)复苏MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞可以用于莪术醇对人多发性骨髓瘤细胞增殖抑制及促凋亡作用的研究

莪术醇对体外MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制研究研究目的1.探讨莪术醇对MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞的生物学行为的影响。2.探讨莪术醇影响体外MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞生物学行为的信号传导通路及分子机制。

研究方法1.对MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞株用不同浓度的莪术醇处理,分别于24h、48h、72h、96h后,采用CCK-8方法检测MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞株的细胞活力,从而分析不同浓度的莪术醇试剂对MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞增殖能力的影响。

2. 应用流式细胞仪和细胞凋亡检测试剂盒检测不同浓度莪术醇对体外MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞的细胞凋亡率的影响。应用Western Blot方法检测不同浓度莪术醇处理MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞后,与发生凋亡的相关蛋白Survivin、Bcl-2和Bax的表达变化,分析探讨莪术醇诱导MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞凋亡的分子生物学机制。

3. 分别应用流式细胞仪和细胞周期检测试剂盒检测不同浓度莪术醇对体外MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞的细胞周期的影响,观察莪术醇对MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞周期分布的影响。应用Western Blot方法检测细胞周期相关蛋白p21、p27、cyclinD1的表达,分析探讨莪术醇诱导MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞G0/G1周期阻滞的分子生物学机制。

4. 应用Western Blot方法检测莪术醇对体外MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞TLR4/NF-KB信号通路的影响,分析莪术醇抑制MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞生长的的分子生物学机制。

5. 结合前期的芯片数据统计分析的结果,应用定量PCR方法检测莪术醇对某些差异性表达基因的影响,进一步验证这些基因在多发性骨髓瘤诱导骨细胞凋亡过程中发挥的作用。

研究结果1.莪术醇对MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞增殖能力的影响:不同浓度的莪术醇处理体外MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞和LP-1细胞达24h、48h、72h、96h后,应用CCK-8方法检测MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞的增殖能力。结果表明:莪术醇能明显抑制MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞的增殖能力,并且与时间和浓度因素成正相关。

2. 莪术醇对MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响:应用不同浓度莪术醇处理RPMI 8226细胞和LP-1细胞后,分别采用流式细胞仪和细胞凋亡检测试剂盒检测细胞的凋亡率。结果表明:莪术醇能明显诱导多发性骨髓瘤细胞的凋亡发生,并且随着莪术醇浓度的增加,其凋亡率显著增加,具有明显的浓度依赖性。应用Western Blot方法检测凋亡相关蛋白的表达,结果:与对照组相比,莪术醇处理组细胞中抗凋亡蛋白Survivin和Bcl-2的表达水平明显下降,而促凋亡蛋白Bax表达则明显升高。

3.莪术醇对MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞周期的影响:应用流式细胞仪和细胞周期检测试剂盒分别检测不同浓度莪术醇对体外MOLP-8细胞系|人多发性骨髓瘤细胞的细胞周期的影响。

参考文献

[1]The Pseudogene DUXAP8 Promotes Non-small-cell Lung Cancer Cell Proliferation and Invasion by Epigenetically Silencing EGR1 and RHOB[J].Ming Sun;;Feng-qi Nie;;Chongshuang Zang;;Yunfei Wang;;Jiakai Hou;;Chenchen Wei;;Wei Li;;Xiang He;;Kai-hua Lu.Molecular Therapy,2017

[2]Curcumol triggers apoptosis of p53 mutant triple-negative human breastcancer MDA-MB 231 cells via activation of p73 and PUMA[J].Lanzhen Huang;;Ang Li;;Guanzhen Liao;;Feicheng Yang;;Jing Yang;;Xu Chen;;Xiaoshan Jiang.Oncology Letters,2017(1)

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[4]Hyperhaploidy is a novel high-risk cytogenetic subgroup in multiple myeloma.[J].Sawyer J R;;Tian E;;Shaughnessy J D;;Epstein J;;Swanson C M;;Stangeby C;;Hale C L;;Parr L;;Lynn M;;Sammartino G;;Lukacs J L;;Stein C;;Bailey C;;Zangari M;;Davies F E;;Van Rhee F;;Barlogie B;;Morgan G J.Leukemia,2017

[5]田鸿来.莪术醇对人多发性骨髓瘤细胞增殖抑制及促凋亡作用的研究[D].山东大学,2018.