GST标签蛋白纯化试剂盒

背景^[1-7]

GST标签蛋白纯化试剂盒将目标蛋白与GST融合表达，然后利用固定化的谷胱甘肽进行纯化，是比较经典的纯化路线。简单，快捷，纯度高。GST标签蛋白纯化试剂盒将亲合层析技术与离心柱技术相结合，提供了一种快速简便的融合蛋白纯化途径。谷胱甘肽-S-转移酶（GST）是基因工程重组蛋白设计和表达过程中一种常用的融合标签。重组蛋白与GST融合后,不仅稳定性提高、可溶性增强,而且为下游的分离纯化带来了极大地方便。

GST分子量约为26 kDa,与还原型谷胱甘肽（GSH）有极强的亲和力,因此可以利用固定化的GSH实现对GST融合蛋白的一步亲和纯化。GST（谷胱甘肽S转移酶）能特异的与谷胱甘肽结合，表现为酶和底物的作用原理，从而利用这个原理，将GST做成标签表达出融合蛋白，与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异性结合，从而纯化出目标蛋白，再用特异性的酶将GST标签切除从而得到天然蛋白。GST，即谷胱甘肽-S-转移酶，与目的蛋白融合表达后，被称为GST标签重组蛋白、GST标签蛋白或GST融合蛋白。

GST标签重组蛋白可以通过GST特异性地结合到GST-tag Purification Resin，而其它蛋白则不能被结合，含GST标签的重组蛋白可被过量的还原型谷胱甘肽(GSH)溶液洗脱，从而实现GST标签蛋白的分离和纯化。由于纯化过程始终保持在温和的非变性条件下，得到的目的蛋白可以保持其自身的生物学活性，因此可以用于常规的结构和功能研究、抗体制备、以及蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。

剂盒中的BGST-tag Purification Resin采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Sepharose CL-6B)为基质，并使用了进一步优化的接臂和GSH偶联技术，可以高容量、高特异性地结合GST标签重组蛋白。和目前市售的大多数同类产品相比，非特异性蛋白结合更低，耐受压力更强，GSH的偶联更加稳定。GST-tag Purification Resin凝胶的颗粒直径为45-165μm。可耐受的压力为0.025MPa，约合5.8psi。

采用固定流速进行蛋白纯化时的推荐流速为0.5ml/min。GST-tag Purification Resin储存在20%乙醇中，10ml总体积中5ml为凝胶，5ml为液体。使用时宜把凝胶充分重悬后再吸取。GST-tag Purification Resin对含GST标签重组蛋白的结合容量大，其对GST结合量为5-6mg蛋白/毫升凝胶，与国际知名品牌的同类产品结合容量相当。

实际使用时的结合量取决于待纯化的GST标签重组蛋白的分子量大小，分子量越大则结合容量越大，分子量越小则结合容量越小。对于目的蛋白分子量为50kD的GST标签重组蛋白，每毫升凝胶的实际纯化量约为8-12mg，对于目的蛋白分子量为100kD的GST标签重组蛋白，每毫升凝胶的实际纯化量约为12-18mg。但对于分子量相同的蛋白，也会因为蛋白本身特性的不同，结合的容量也会有所不同。

特点:

1.用于分离纯化带有GST标签的可溶性重组蛋白，溶解于高浓度变性剂的包涵体蛋白不能用这种介质纯化；

2.特异性好、与GST融合蛋白亲和力高，从细菌破碎液中经一步亲和纯化即可得到纯度超过95%的目标蛋白；

3.结合在介质上的GST融合蛋白，可被溶液中高浓度的还原型谷胱甘肽（GSH）（33 mM）竞争性洗脱。对不同的GST融合蛋白来说，无需摸索的GSH洗脱浓度，使介质的使用更加简单；

4.可再生，并反复使用。

应用^[8]

GST标签蛋白纯化试剂盒可用于带有GST标签的蛋白纯化：

用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组表达质粒Lpp20/pGEX-4T-1在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,收集菌体并采用反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌3种细胞破碎方法,表达产物在谷胱甘肽琼脂糖树脂4B柱上纯化,利用凝血酶切除GST标签,用鼠抗Lpp20单克隆抗体进行纯化产物western blot鉴定。

参考文献

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