小鼠骨髓单核细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠骨髓单核细胞（Mouse Bone Marrow Mononuclear Cells，简称BMSCs）是来源于小鼠骨髓的一种干细胞，具有自我更新、多向分化潜能和低免疫原性等特点。BMSCs在组织工程、细胞治疗、药物筛选和疾病模型等领域具有广泛的应用价值。

小鼠骨髓单核细胞可以从骨髓中分离得到，通过贴壁培养法或流式细胞术等方法进行分离纯化。这些细胞具有高度的增殖能力，能够在体外培养条件下进行大量扩增。同时，BMSCs还具有多向分化潜能，可以在特定诱导条件下分化为骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌肉细胞等。

除了自我更新和多向分化潜能外，小鼠骨髓单核细胞还具有低免疫原性，可以用于异体移植治疗，避免了免疫排斥反应的发生。此外，BMSCs还具有抗炎、免疫调节和组织修复等功能，可以用于治疗多种疾病，如糖尿病、神经退行性疾病、肝病和骨关节炎等。

需要注意的是，小鼠骨髓单核细胞的分离和培养需要严格的无菌条件和操作技术，以保证细胞的纯度和安全性。同时，对于细胞的用途和安全性需要进行充分的评估和验证，以确保其在临床和科研领域的应用价值。

小鼠骨髓单核细胞

小鼠骨髓单核细胞培养操作

1)复苏小鼠骨髓单核细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)小鼠骨髓单核细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)小鼠骨髓单核细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

小鼠骨髓单核细胞可以用于高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血、骨髓单核细胞及骨髓造血干细胞的变化特点及机制研究

高脂饮食对C57BL/6J小鼠骨髓造血干细胞的影响目的外周血和骨髓中的单核细胞主要来源于骨髓中的普通髓系祖细胞,如第一部分所示,高脂饮食时,外周血中单核细胞呈早期减少,后期增加,骨髓单核细胞早期无变化,后期增加,那么,高脂饮食是否对骨髓造血干细胞有影响,这种影响是否参与了外周循环单核细胞的变化，故本研究在前一步部分的基础上,观察高脂饮食下,不同时期小鼠骨髓单核细胞和及其前体骨髓造血干细胞的变化情况,来探讨肥胖发生发展过程中,血中小鼠骨髓单核细胞变化的来源及机制。

方法：5-6周龄的C57BL/6J小鼠经适应性饲养1周后,随机分为两组,高脂饮食组予60%脂肪饲料,低脂饮食组予10%脂肪饲料,分别于3天,7天,15天,15周和19周时,每组各取5只小鼠(19周10只),颈椎脱臼法处理小鼠后,分离其四肢胫骨,剪刀剪断两断,1.5ml注射器(27#或25#针头)吸取1mlFACS冲洗骨髓细胞于5ml EP管中,加入红细胞裂解液,4℃C离心机15000rpm离心5分钟,最后加入500μl FACS重悬细胞,取100μl骨髓细胞进行抗体标记,先每组加入2μ1CD16/32-FITC阻断Fcr受体,lin-抗体(每管每种抗体2μl,共12μl),冰上孵育30分钟后,FACS冲洗,再加入不同的抗体,Qdot-605-Lin-,APC-CD11b,PE-c-kit,AlexaFlour430-CD34,FITC-CD16/32,Percp-Cy5-5-Flt3标记骨髓造血干细胞,冰上孵育30分钟后,加入FACS,4℃离心机15000rpm离心5分钟洗涤细胞后,加入500μl FACS重悬细胞,同时设立对照管,流式细胞仪检测细胞,Flowjo7.0软件处理图像,Prism 7.0进入数据处理,结果以X±平均数表示,统计方法采用两个样本的独立t检验进行统计处理,P<0.05为有统计学意义。

结果：骨髓造血干细胞各亚群细胞（小鼠骨髓单核细胞）占骨髓Lin-百分比的变化特点:1)Lin-细胞群:第15天时,高脂饮食组Lin-细胞群细胞数,与低脂组相比减少,差别有统计学差异(P<0.05);2)sacl-ckit+细胞群,第3天、15周时两组间比较有统计学意义,高脂饮食组细胞数减少(P<0.05);3)CMP细胞群:两组相比,第3天时,高脂饮食组百分比较低脂组较多,差异有统计学意义(P<0.05),GMP群7两组间整个实验时间段,两组相比,无差异;4)LT-HSC细胞群,第7天时,两组细胞数相比有统计学差异(P<0.05),其中高脂饮食组明显减低;5)MPP细胞群,两组间相比,第15天时,高脂饮食组较低脂饮食组减少,差异有统计学意义(P<0.05);5)19周时,两组相比,整个骨髓造血干细胞各亚群无明显差异(P>0.05)。

参考文献

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[5]刘艳霞.高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血、骨髓单核细胞及骨髓造血干细胞的变化特点及机制研究[D].郑州大学,2018.