NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系是一种来源于人类小细胞肺癌的贴壁细胞系。这种细胞系在体外培养条件下生长迅速，易于传代和冻存，因此被广泛应用于小细胞肺癌的研究。

NCI-H774细胞系是1980年代由美国国立癌症研究所(NCI)从一名患有小细胞肺癌的患者体内分离出来的。这种细胞系具有高度的增殖能力和对化疗药物的敏感性，因此被广泛用于小细胞肺癌的生物学研究、药物筛选和临床试验。

NCI-H774细胞系的主要特点是：

贴壁生长：这种细胞系在体外培养条件下需要贴附在培养皿或瓶壁上生长。

高度增殖：NCI-H774细胞系具有高度的增殖能力，可以在短时间内达到较高的细胞密度。

对化疗药物敏感：这种细胞系对多种化疗药物具有敏感性，因此被广泛用于小细胞肺癌的生物学研究和药物筛选。

易传代和冻存：NCI-H774细胞系容易进行传代和冻存，这使得它成为一种非常有价值的实验材料。

NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系

NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系培养操作

1)复苏NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于新型苯并咪唑类微管蛋白抑制剂的设计、合成及活性研究

以5-氟-2-硝基苯胺和不同取代的苯酚为起始原料，通过亲核取代、硝基还原、合环、氨化、水解、酰化等反应，共计合成26个目标化合物，经数据库检索结构均为首次报道。采用肿瘤细胞生长抑制实验对上述目标化合物的抗肿瘤活性进行筛选，结果显示，该类化合物对肿瘤细胞系NCI-H460、COLO205、K562、A431、HepG2、Hela、NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系和MDA-MB-435S均具有较好的抑制活性。其中化合物65、71、80和82的抗肿瘤活性与阳性药紫杉醇相当，活性最好的化合物80对肿瘤细胞系NCI-H460、NCI-H774人小细胞肺癌贴壁细胞系、COLO205、K562、A431、HepG2、Hela和MDA-MB-435S的IC50值分别为0.040、0.050、0.006、0.026、1.774、0.452和0.052μM（紫杉醇IC50值分别为0.010、0.003、0.004、0.007、0.990、0.410、0.009μM）。

参考文献

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[2]Natural product drug discovery:the successful optimization of ISP-1 and halichondrin B[J].Bryan KS Yeung.Current Opinion in Chemical Biology,2011(4)

[3]Improved Results of a Surgical Resection for the Recurrence of Hepatocellular Carcinoma After Living Donor Liver Transplantation[J].Akinobu Taketomi;;Takasuke Fukuhara;;Kazutoyo Morita;;Hiroto Kayashima;;Mizuki Ninomiya;;Yoichi Yamashita;;Toru Ikegami;;Hideaki Uchiyama;;Tomoharu Yoshizumi;;Yuji Soejima;;Ken Shirabe;;Yoshihko Maehara.Annals of Surgical Oncology,2010(9)

[4]A phase I study of larotaxel(XRP9881)administered in combination with carboplatin in chemotherapy-na?ve patients with stage IIIB or stage IV non-small cell lung cancer[J].Francisco Robert;;Karen Harper;;Judie Ackerman;;Sunil Gupta.Cancer Chemotherapy and Pharmacology,2010(2)

[5]王文娜.新型苯并咪唑类微管蛋白抑制剂的设计、合成及活性研究[D].吉林大学,2014.