精氨酸支原体PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

精氨酸支原体PCR试剂盒是一种用于检测精氨酸支原体的荧光定量PCR试剂盒。该试剂盒采用精氨酸支原体探针法，通过荧光定量PCR技术，实现对精氨酸支原体的快速、准确检测。

使用精氨酸支原体PCR试剂盒进行检测的步骤包括核酸提取、扩增和荧光检测。首先，从待测样本中提取出核酸，然后将其加入到试剂盒中，按照试剂盒说明书进行扩增和荧光检测。在检测过程中，如果样本中存在精氨酸支原体，其特异的引物和探针将与核酸结合，通过PCR技术扩增出特定的片段，荧光检测系统则会捕获荧光信号，从而实现对精氨酸支原体的检测。

精氨酸支原体PCR试剂盒具有高灵敏度、高特异性和高准确性等特点，可广泛应用于临床诊断、食品检测、环境监测等领域。

精氨酸支原体PCR试剂盒

精氨酸支原体PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据精氨酸支原体PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在精氨酸支原体的感染。

应用^[4-5]

精氨酸支原体PCR试剂盒可以用于应用PCR法检测生物制品中支原体污染

为了完善生物制品中支原体污染的检测技术,本研究针对口腔支原体(Ora)、精氨酸支原体(Arg)、发酵支原体(Fer)、莱氏无胆甾原体(Ala)、猪鼻支原体(Mho)、猪肺炎支原体(Mhp)、鸡毒支原体(Mg)、牛支原体(Mbo)、衣阿华支原体(Mi)、滑液支原体(Ms)、絮状支原体(Mf)、火鸡支原体(Mm)、鸡支原体(Gal)、鸭支原体(Ma),共计14种污染生物制品的常见支原体设计引物,建立精氨酸支原体PCR试剂盒PCR检测方法,并应用此方法对多种生物制品进行检测。

精氨酸支原体PCR试剂盒试验结果如下：1.生物制品中支原体污染的精氨酸支原体PCR试剂盒PCR检测方法的建立对14种支原体标准株的基因组序列进行分析,自行设计出一对可以检测这14种支原体的通用引物,同时培养这14种支原体,获取DNA模板,进行PCR扩增反应。精氨酸支原体PCR试剂盒结果显示14个模板均有目的片段,且片段大小在440bp-467bp之间,以此建立生物制品中支原体污染的PCR检测方法,扩大污染生物制品的支原体检测范围。

2. 生物制品中支原体污染的PCR检测方法的敏感性及特异性试验使用颜色变化单位法(CCU法)检测出8种支原体培养物的浓度后,对已建立的精氨酸支原体PCR试剂盒PCR检测方法进行敏感性试验。结果显示,此方法可以检测到8种支原体的最小浓度在1CCU～10CCU之间；在特异性试验中,选取各类细菌及病毒14种作对照,结果14种对照均不发生扩增反应。试验结果说明此PCR检测方法敏感性良好,特异性强。

3.生物制品中支原体污染的精氨酸支原体PCR试剂盒PCR检测方法的应用应用此方法对10种兽用活疫苗中71个批次的样品和11种细胞系的24份传代细胞样品进行支原体污染检测,结果有3份疫苗样品为阳性、6份细胞样品为阳性。在对比其他支原体污染的检测方法中,已建立的PCR检测方法与培养法、DNA荧光染色法的检测结果均相同,但商品化支原体PCR检测试剂盒主要针对污染细胞的5种支原体有扩增反应,其检测结果是2份疫苗样品为阳性、6份细胞样品为阳性,产生漏检现象。精氨酸支原体PCR试剂盒试验结果说明此PCR检测方法的检测结果准确性高,避免出现漏检现象,有较好的应用前景。

参考文献

[1]Highlights of mycoplasma research—An historical perspective[J].Shmuel Razin;;Leonard Hayflick.Biologicals,2009(2)

[2]Mycoplasma synoviae invades non-phagocytic chicken cells in vitro[J]..Veterinary Microbiology,2009(1)

[3]Genetic Relationships among Mycoplasmas Based on the 16S‐23S rRNA Spacer Sequence[J].Ry?Harasawa.Microbiology and Immunology,1999(2)

[4]Application of PCR for detection and identification of mycoplasma contamination in virus stocks[J].Mengdong Hu;;Charles Buck;;Denise Jacobs;;Grace Paulino;;Hoda Khouri.In Vitro Cellular&Developmental Biology-Animal,1995(9)

[5]英聪.应用PCR法检测生物制品中支原体污染[D].华中农业大学,2014.