兔腹腔巨噬细胞的应用

背景^[1-3]

兔腹腔巨噬细胞是一种常用的细胞模型，用于研究巨噬细胞的生理和病理作用。巨噬细胞是一种重要的免疫细胞，在抗感染、抗肿瘤和免疫调节等方面发挥着重要作用。

兔腹腔巨噬细胞的分离和培养通常采用腹腔注射刺激物的方法，例如无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤等，以刺激巨噬细胞的聚集和增殖。然后，收集腹腔细胞并进行分离纯化，得到纯度较高的巨噬细胞。

兔腹腔巨噬细胞具有吞噬、降解、释放炎症介质、介导炎性细胞趋化、抗原呈递等活性，这些活性与巨噬细胞在体内的功能密切相关。因此，兔腹腔巨噬细胞是研究巨噬细胞功能和作用机制的重要工具。

此外，兔腹腔巨噬细胞还可以用于药物筛选和疫苗研制等领域。例如，可以将其用于测试新药对巨噬细胞活性的影响，或用于研究疫苗对巨噬细胞的刺激作用等。

兔腹腔巨噬细胞

兔腹腔巨噬细胞具有以下特点：

形态特征：兔腹腔巨噬细胞呈多角形或不规则形状，大小不一，有明显的核仁和胞质。

生长特性：兔腹腔巨噬细胞具有较强的增殖能力，可以在体外持续传代，并且可以在体内形成新的细胞。

基因表达：兔腹腔巨噬细胞通常表达多种与免疫功能相关的基因，如MHC-II、CD80/86等。

兔腹腔巨噬细胞在生物学研究中具有广泛的应用价值，例如用于研究免疫应答机制、筛选抗肿瘤药物、评估治疗效果等。同时，由于免疫系统是机体抵御疾病的重要防线之一，因此兔腹腔巨噬细胞也被广泛应用于免疫学的研究中。

兔腹腔巨噬细胞培养操作：

1)复苏兔腹腔巨噬细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)兔腹腔巨噬细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)兔腹腔巨噬细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

兔腹腔巨噬细胞可以用于普罗布考对动脉粥样硬化兔HDL功能的影响及其调控机制探讨

以动脉粥样硬化兔模型为研究对象,观察肝细胞、兔腹腔巨噬细胞ABCA1、SR-BI表达及其[3H]胆固醇转出率和HDL亚类在AS形成的作用,同时分析在AS状态下普罗布考对上述指标的影响,从而探讨RCT过程中普罗布考抗动脉粥样硬化新机制。

方法：18只新西兰大白兔随机分为：①正常对照组(n=6)：给予普通饮食喂养；②动脉粥样硬化(AS)组(n=6)：饲以高脂饲料；③普罗布考组(n=6)：在饲以高脂饮食基础上给予普罗布考[400mg/(kg·d)]。12周后取血以酶法测定血脂；利用流式细胞仪检测兔腹腔巨噬细胞、肝细胞表面ABCA1、SR-BI蛋白表达量；液闪计数仪检测兔腹腔巨噬细胞、肝细胞[3H]胆固醇转出率；沉淀法测定血浆HDL2及HDL3浓度；将主动脉常规HE染色进行组织病理学观察,测量其主动脉内中膜厚度(IMT)。

结果：

1、AS组兔腹腔巨噬细胞(5.79±0.97 vs 11.45±2.15,P<0.001)、肝细胞(10.16±2.01 vs 19.48±2.19,P<0.001)[3H]胆固醇转出率较正常对照组明显下降；普罗布考组腹腔巨噬细胞(11.20±1.45 vs 5.79±0.97,P<0.001)、肝细胞(20.41±2.49 vs 10.16±2.01,P<0.001)[3H]胆固醇转出率较AS组明显增加。

2、12周后各组兔肝细胞及巨噬细胞ABCA1蛋白表达情况：AS组肝细胞(3.25±0.97 vs 5.29±1.71,P<0.05)及巨噬细胞(16.49±4.10 vs 24.93±3.85,P<0.05)ABCA1蛋白表达较正常对照组下调

结论1、普罗布考降低AS兔血浆TC、LDL-C、HDL-C水平。2、普罗布考通过上调AS兔腹腔巨噬细胞、肝细胞ABCA1及SR-BI的表达从而增加其[3H]胆固醇转出率,具有增强RCT作用。

参考文献

[1]cAMP-induced expression of ABCA1 is associated with MAP-kinase-pathway activation[J].Thomas Witzlack;;Tina Wenzeck;;Joachim Thiery;;Matthias Orth.Biochemical and Biophysical Research Communications,2007(1)

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[5]王振坤.普罗布考对动脉粥样硬化兔HDL功能的影响及其调控机制探讨[D].南方医科大学,2011.