原阿片碱的生物制法

背景技术

原阿片碱(Protopine)具有胆碱酯酶抑制作用，并具有非选择性离子通道阻滞作用，可用于治疗早老性痴呆病，是早老性痴呆的一种潜在侯选药。若从天然产物中提取该化合物，则不失为一种简单、经济而有效的方式。原阿片碱(Protopine)化学名为：7-methyl-2，3：9，10-bis(methlenedioxy)-7，13a-secoberbin-13a-one，从夏天无中分离生物总碱的文献较多，但分离原阿片碱的文献较少，且所得的原阿片碱产率一般不超过0.1％。如专利CN1445227A(夏天无总生物碱的提取方法及其新的用途，申请号02111103.0)：夏天无药材在稀盐酸中煎煮液过大孔吸附树脂，水洗后用乙醇洗脱；乙醇洗脱液过氧化铝凝胶柱，然后，在碱性条件下，析出生物总碱。由于夏天无中的生物碱四氢巴马亭的盐酸盐，在水中溶解度很小，从而不利于原阿片碱的分离；另外，由于盐酸的煎煮产生大量杂质，结果原阿片碱不能有效地从药材中抽提出来。

发明内容

本发明人对原阿片碱的提取进行了潜心研究，筛选出较佳地从夏天无中提取原阿片碱的方法，由此完成了本发明。

故本发明要解决的技术问题即是克服上述现有技术的缺陷，提供了一种从夏天无中提取原阿片碱的方法。

本发明的上述技术问题是通过下列技术方案实现的：

一种从夏天无中提取原阿片碱的方法，其包括以下步骤：

(1)将夏天无药材在85～100％乙醇中热提，浓缩提取液；

(2)回收步骤(1)中经浓缩的提取液中的乙醇，在残留液体中加入浓度为0.5～15％的盐酸，放置使盐酸不溶物充分析出；

(3)将步骤(2)中的盐酸不溶物滤去，滤液用浓度为1～30％的强碱溶液中和，得生物碱沉淀a；

(4)在步骤(3)中得到的生物碱沉淀a中加入0.5～15％的盐酸与85～100％乙醇，滤去不溶物，滤液用1～30％强碱溶液中和，再一次得生物碱沉淀b，洗涤并干燥得到固体物；

(5)将步骤(4)中得到的固体物进行结晶，即得原阿片碱晶体；

其中，步骤(1)中夏天无与乙醇的比例通常为1kg药材∶5～50L乙醇，所说的热提一般是指回流提取，相应的温度为78～85℃；其提取次数可以是1～5次，每次提取时间可为1.5～5小时，多次提取时，显然也可在上述温度下直接加热提取，并将各次提取液合并再浓缩。

至于步骤(2)中在残留液体中加入盐酸，较佳地是，至pH为0.5～2，放置10～24小时使盐酸不溶物充分析出；其中，pH太低，如接近于0，虽盐酸不溶物析出快，但需加盐酸量大，且操作风险大(强酸环境)，而pH高于2则盐酸不溶物析出慢且不够充分；至于时间太短则盐酸不溶物不能充分析出，反之，时间越长，虽然析出充分，但延长了生产周期。

而步骤(3)中滤液用强碱溶液中和，较佳地是，至pH为10～12；其中，pH太高，如接近于14，则需加强碱量大，且操作风险大(强碱环境)，而pH低于10，则沉淀不够完全。

同理，步骤(4)中在生物碱沉淀a中加入盐酸和乙醇，较佳地是，至pH为0.5～3，而滤液用强碱溶液中和，较佳地是，至pH为8～12，从而制得生物碱沉淀b。该生物碱沉淀b进行常规洗涤以除去杂质和过量的强碱溶液后，再进行干燥得到白色固体物。

而步骤(5)中可采用氯仿、甲醇、乙醇、乙醚和丙酮等有机溶剂中的一种或几种来进行结晶，如可按常规方法，于60℃将白色固体溶于上述溶剂中，冷却至室温；还可进一步重结晶，得无色原阿片碱晶体，熔点203～204℃，与对照品作混合熔点测定亦不下降。

较佳地是，该有机溶剂为体积比1∶1～2的氯仿和甲醇。

根据本发明，上述盐酸浓度较佳地是3～12％；更佳地是8～10％。

而上述强碱溶液可以是氢氧化钠或氢氧化钾等溶液，其浓度较佳地是5～20％；更佳地是9～15％。

而乙醇溶液浓度较佳地是88～98％；更佳地是90～95％。

本发明从夏天无中提取原阿片碱的方法中，步骤(2)～(4)，即将生物碱溶于盐酸或强碱中和时的温度条件较佳地是0℃～50℃，通常是不需额外加热与冷却的室温下，可减少原阿片碱的损失。

与现有技术相比，本发明具有明显的优点：(1)污染少：如王兆全于中草药通讯1977年第8期第13页所报道的提取方法，采用毒性强的苯作为溶剂，本发明所采用的溶剂，均能有效地回收而重复使用，因此降低污染的同时也降低成本；(2)用时短：本发明不需过柱，而且溶剂总量低，步骤少；(3)成本低：本发明所采用的设备，均为常规设备，溶剂可套用，耗能低；(4)得率高：采用本发明的方法，提取安全；从人工栽培的夏天无中提取，残留于药材与其他生物碱中原阿片碱的含量极低，晶体原阿片碱的得率明显提高，占生药量可大于0.24％(W/W)；(5)纯度高：经高效液相色谱分析，其纯度也显著提高，大多在99.5％以上；(6)耗能低：使用的溶剂总量低，涉及的水溶液，不需加热与冷却。

具体实施方法

制得的晶体经高效液相色谱分析法鉴定和测定含量，具体如下：

1、TLC鉴定：经氯仿加乙二胺；丙酮加乙二胺；石油醚，乙醚，甲醇及氨水；多种展开剂鉴定，分离得到的原阿片碱晶体与原阿片碱对照品，其Rf值相同。

2、HPLC含量测定(顾孝红，唐平，靳祖英.反相高效液相色谱法测定夏天无中原阿片碱的含量.时珍国医国药，2002，13(10)：608-609)：

色谱仪：岛津SHIMADZU：SPD-10A，LC-10AD，C-R8A

波长282nm；流动相：乙腈∶甲醇∶0.2％磷酸＝150∶100∶750，二乙胺调pH＝3

色谱柱：Shim Pack-CLC-ODS

流速：1ml/分钟

样品浓度：3.35mg/ml

温度：20℃

上述对照品原阿片碱：购于中国药品生物制品检定所。

称取干净的夏天无8千克，置于100L的提取釜中，加入40L 85％乙醇，加热至80℃，2小时，将提取液经纱布滤出，滤渣留于提取釜中，再加40L85％乙醇，继续热提2小时，两次滤液合并；回收(即浓缩)其中的乙醇，得残留液体10L。于上述残留液体中，加入10L 5％盐酸至pH为2，放置10小时；滤去盐酸不溶物，滤液用15％的氢氧化钠水溶液中和pH＝12得生物碱沉淀a；将生物碱沉淀a溶于5L 5％盐酸，同时加入85％乙醇500ml，使溶液pH为3，滤去新产生的沉淀；滤液用15％的氢氧化钠水溶液中和，pH＝12，得生物碱沉淀b，用蒸馏水洗涤该沉淀b至pH＝8，干燥得白色固体物；该固体经氯仿与甲醇(体积比为1∶1)结晶与重结晶，得含量99.65％的无色透明原阿片碱晶体19.27g。

参考文献：CN1683372A