抗体蛋白标记(抗体/蛋白标记)的介绍

背景及概述^[1]

抗体蛋白标记(抗体/蛋白标记)是通过各种方式获得目标抗体后，为了增强反应灵敏度，科研人员利用级联放大的反应原理，将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，如HRP，FITC，Biotin等物质，通过这些标记物的增强放大效应来显示或定量反应系统中抗原或抗体的性质与含量。如有研究利用抗体蛋白标记(抗体/蛋白标记)制备了R-藻红蛋白标记抗体荧光探针，利用异型双功能交联剂SPDP分别在RPE和抗体上衍生吡啶二硫基团，然后用DTT还原抗体的SPDP衍生物以引入2SH，将携带吡啶二硫基的RPE与携带巯基的抗体按一定摩尔比交联制备荧光抗体探针。

将SPDP按100∶1的摩尔比分别与RPE和抗体混匀，铝箔封好后于室温旋转反应2h，超滤离心除去多余的SPDP。取DTT按100∶1的摩尔比与抗体衍生物充分混匀，室温静置反应1h，超滤离心除去多余的DTT。调整抗体2HS与RPE衍生物的摩尔比为1∶1，铝箔封好后于23℃振荡反应20h。加NEM封闭多余巯基，室温旋转反应60min。利用HPLC分离纯化，收集交联物洗脱峰。检测合格后加0102%叠氮化钠后4℃保存。结果表明阳性微球在蓝、绿光激发下发射桔黄色荧光，荧光明亮，无背景光干扰，特异性好，灵敏度高，可检测蛋白浓度为1185×10-5mg·mL-1的H9亚型尿囊毒。利用抗体蛋白标记(抗体/蛋白标记)制备的R-藻红蛋白标记探针的检测灵敏度高于FITC标记探针，R-藻红蛋白可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测。

主要参考资料

[1]  R-藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在禽流感病毒检测中的应用