科罗索酸的应用及制备

背景及概述^[1]

科罗索酸(corosoli科罗索酸cid，CRA)，又名2α－羟基熊果酸，为一种天然的五环三萜酸，存在于对萼猕猴桃、大叶紫薇、枇杷等植物中。因不同植物被某一地区传统地运用于不同疾病并可取得疗效而引起科学家们的重视，从而研究提取到其中有效成分包括科罗索酸，近年来研究发现科罗索酸具有降血糖、减肥、抗肿瘤、抗炎、抗病毒和抗心血管疾病的作用，并进一步研究其作用机理，寻找其发挥药物效能的微观证据。科罗索酸作为防治肥胖症和Ⅱ型糖尿病新药，已进入美国FDA的Ⅲ期临床药效学评价，作为防治肥胖症和Ⅱ型糖尿病植物新药和功能性天然保健食品医药原料，受到人们广泛关注。随着研究的不断深入，该产品将具有非常广阔的市场前景。

结构

应用^[2]

科罗索酸具有抗炎、抗氧化、降血糖、减肥、抗病毒和抗心脑血管疾病作用，具有广阔的应用前景。

1）呼吸系统癌症

有研究表明科罗索酸以浓度和时间依赖性的方式，诱导细胞停滞于亚G1期，抑制肺癌A549细胞活力，通过以活性氧(ROS)依赖性方式减少抗凋亡蛋白，增加含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(科罗索酸spase)活性，进而诱导细胞凋亡。体内实验H1也表明，科罗索酸通过抑制信号转导和转录激活因子3(STAT3)的活化，增加浸润淋巴细胞的数量，显著抑制鼠肉瘤模型中的皮下瘤的发展和肺癌细胞的转移。经证实，科罗索酸对人肺癌A549细胞实体瘤具有一定的治疗作用，其作用机制可能与抑制肿瘤组织中血管内皮生长因子VEGF和CD34蛋白的表达有关。科罗索酸可以抑制鸡胚绒毛尿囊膜科罗索酸M和卵黄囊膜YSM血管生成，表明科罗索酸对A549的抑制生长作用机制可能是通过抑制肿瘤血管生成而实现的。

2）消化系统癌症

科罗索酸对人胃癌BGC823细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性，其中可能的机制是抑制NF-KB亚基p65的表达，增加IKBot的表达。科罗索酸联合5一氟尿嘧啶处理胃癌SNU-620细胞可以抑制细胞活力，通过降低Bcl-2，升高Bim，抑制roTOR来增加5-氟尿嘧啶的抗癌活性。科罗索酸通过与ATP结合口袋直接相互作用来抑制VEGFR2激酶活性，从而降低对VEGFR2／Src／FAK／cdc42轴的控制，降低F一肌动蛋白的形成和迁移活性，可能是治疗肝细胞肝癌(HCC)的新手段。科罗索酸可以提高3TrCP蛋白质的稳定性，通过提高LATSl的磷酸化来增强J3TrCP依赖性的YAP的泛素化，放线菌素D(AD)通过升高YAP同时下调13TrCP来增强科罗索酸诱导的肝癌细胞凋亡。科罗索酸可以通过促进B-联蛋白N末端的磷酸化降低结肠癌细胞内B一联蛋白的表达，并抑制由腺瘤性结肠息肉病大肠杆菌APC突变导致的结肠癌细胞的生长，发挥其对结肠癌细胞的抗癌活性。

3）生殖系统癌症

经科罗索酸处理的宫颈癌Hela细胞，Bax蛋白表达明显增高，而Bcl-2不变，导致Bax／Bcl-2比率增加，线粒体通透性增加，进而诱导细胞凋亡m1。科罗索酸通过诱导细胞停滞于G2／M期，下调P13K和Akt蛋白的表达，进而抑制宫颈癌上皮细胞科罗索酸Ski的增殖。作为STArl3的抑制剂，科罗索酸能够增加上皮卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性，增强紫杉醇，顺铂和阿霉素的抗癌作用，并抑制上皮卵巢癌细胞与致瘤性巨噬细胞的细胞一细胞相互作用¨9|。科罗索酸对乳腺癌细胞MCF-7、MDA—MB-231及正常乳腺细胞MCF一10A均具有明显抑制作用。科罗索酸也是通过增加Bax／Bcl-2的比率来诱导人乳腺癌MDA—MB-231细胞的凋亡，可能的机制是调节了p38／MAPK信号转导途径。研究表明人工合成科罗索酸的类似物也对乳腺癌MDA-MB-231细胞起作用，可以使其停滞于有丝分裂期。

4）其他癌症

科罗索酸以剂量和时间依赖性的方式抑制骨肉瘤MG-63细胞的生存能力，这与科罗索酸spase-3和科罗索酸spase-9的活化，及线粒体膜电位的丧失和线粒体中细胞色素C的释放有关，表明科罗索酸是通过激活线粒体途径诱导骨肉瘤细胞凋亡的。科罗索酸可能通过靶向骨髓来源的抑制细胞(MDSC)的免疫抑制活性，增强阿霉素和顺铂的抗肿瘤作用，可能与降低环氧合酶-2和CCL2的mRNA表达有关。科罗索酸可以剂量依赖性地抑制人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖，并能诱导该细胞的分化瞄J。研究心叫表明，科罗索酸通过诱导HL一60细胞染色质缩合和DNA断裂，增强线粒体功能障碍和科罗索酸spase一3、科罗索酸spase一8和科罗索酸spase-9活化，上调Bid和Bax，而Bcl-2和Bcl—xL不受科罗索酸的影响，科罗索酸可能是治疗人类白血病的潜在化学治疗剂。

制备^[1]

枇杷叶总三萜酸的分离制备方法是：以枇杷叶为原料，采用5～15倍枇杷叶干重(W/W)的80～100％亲水性有机溶剂水溶液，在pH值4～11条件下，于50～80℃提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤；滤液在pH值>7的条件下静置陈化、过滤去除不溶物；滤液于50～80℃趁热进行活性炭脱色，过滤；滤液经减压回收部分溶剂后，调整pH值至8～12、亲水性有机溶剂浓度达20～50％和总三萜酸浓度为0.5～10.0g/L，其中科罗索酸浓度达0.2～5.0g/L。

科罗索酸的树脂富集纯化方法是：所述步骤中的枇杷叶总三萜酸溶液经大孔吸附树脂吸附科罗索酸至饱和，先用不少于1倍树脂量(V/V)的纯水洗去未被吸附的枇杷叶总三萜酸残留料液和不少于2倍树脂量(V/V)的25～55％亲水性有机溶剂水溶液洗去吸附力较科罗索酸弱的杂质，再用不低于3倍量(W/W)的40～60％亲水性有机溶剂水溶液，在pH值8～12条件下，以1～3倍树脂量(V/V)/小时的流速洗脱科罗索酸；洗脱液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收部分溶剂后，加入科罗索酸溶解度调节剂，控制洗脱液体系中亲水性有机溶剂终浓度≤50％和pH值≤7，缓慢冷却至开始析出科罗索酸结晶、4～10℃冷藏、静置养晶、过滤，得科罗索酸粗品。

科罗索酸的结晶纯化方法是：50～80℃条件下，科罗索酸粗品用不低于3倍量(W/W)的亲水性有机溶剂充分萃取科罗索酸，过滤，滤液缓慢冷却至开始析出科罗索酸、4～10℃冷藏、静置养晶、过滤、室温条件下水洗，得科罗索酸结晶。

主要参考资料

[1] CN201310144494.6一种科罗索酸的制备方法

[2] 科罗索酸在抗肿瘤方面的研究进展

[3] CN200710009556.7从枇杷叶中分离制备科罗索酸的方法