BAR-T 人食管上皮细胞系的应用

背景^[1-3]

BAR-T人食管上皮细胞系是一种用于研究食管疾病的实验细胞系。这种细胞系来源于人食管上皮细胞，经过特定的实验条件和培养方法获得。

BAR-T人食管上皮细胞系具有一些重要的特点，使其在食管科学研究中有广泛的应用。首先，这种细胞系保持了与人体食管上皮细胞的相似性，可以模拟食管上皮细胞的生理和病理过程。这使得研究人员可以通过使用这种细胞系来研究食管疾病的发病机制、药物作用和治疗效果等。

其次，BAR-T人食管上皮细胞系具有较好的稳定性和可重复性。这种细胞系可以在实验室条件下进行长期培养和繁殖，使得研究人员可以获得足够的细胞用于实验。此外，这种细胞系的实验结果具有较好的可重复性，有助于提高研究的可靠性和准确性。

此外，BAR-T人食管上皮细胞系还具有较好的应用前景。随着食管疾病研究的深入，这种细胞系的应用价值将得到更广泛的认可。研究人员可以使用这种细胞系来探索食管疾病的发病机制、开发新的药物和治疗方案，以及评估不同因素对食管上皮细胞的影响等。

BAR-T人食管上皮细胞系

BAR-T人食管上皮细胞系细胞培养操作

1)复苏BAR-T人食管上皮细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)BAR-T人食管上皮细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)BAR-T人食管上皮细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

BAR-T人食管上皮细胞系可以用于胆汁酸在诱导Barrett's食管肠上皮化生作用中的机制及临床意义

Barrett’s食管(Barrett’s esophagus,BE)是胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)最严重的并发症,同时也是食管腺癌最重要的癌前病变。在西方国家,BE的发病率呈逐年上升趋势。目前关于BE的发生机制尚未阐明。过去认为,长期酸暴露可以引起BE,但也有学者提出胆汁酸在BE发生发展中的作用更为重要。

本实验拟研究不同浓度胆汁酸对BAR-T人食管上皮细胞系细胞形态、超微结构的影响,探讨BE化生的机制及其临床意义。

方法(1)购买人原代BAR-T人食管上皮细胞系,在我院中心实验室用DMEM含血清的细胞培养液进行细胞培养,并进行传代、冻存、复苏及化学刺激。(2)挑选生长良好的细胞,每天分别用250umol/L、400umol/L、500umol/L胆汁酸刺激3次,连续7天,并在倒置相差显微镜下观察细胞形态改变,在透射电镜下观察超微细胞结构改变。

结果(1)对照组细胞组在显微镜下可见正常细胞形态,当细胞生长至7天出现多数细胞接触抑制、细胞凋亡;实验组BAR-T人食管上皮细胞系细胞生长时间较对照组长,有正常接触抑制,凋亡少见。(2)在透射电镜下:对照组可见正常细胞微结构,实验组可见线粒体肿胀变形、核仁边集、双核仁及自噬小体形成。

结论(1)BAR-T人食管上皮细胞系在胆汁酸刺激下出现形态、结构变化。(2)不同浓度胆汁酸对BE细胞系作用不同,随着浓度增加,细胞出现异型增生趋势。

参考文献

[1]Mechanisms of Barrett's oesophagus:Intestinal differentiation,stem cells,and tissue models[J].Hiroshi Nakagawa;;Kelly Whelan;;John P.Lynch.Best Practice&Research Clinical Gastroenterology,2015

[2]Central Adiposity Is Associated With Increased Risk of Esophageal Inflammation,Metaplasia,and Adenocarcinoma:A Systematic Review and Meta-analysis[J].Siddharth Singh;;Anamay N.Sharma;;Mohammad Hassan Murad;;Navtej S.Buttar;;Hashem B.El–Serag;;David A.Katzka;;Prasad G.Iyer.Clinical Gastroenterology and Hepatology,2013

[3]Barrett's metaplasia glands are clonal,contain multiple stem cells and share a common squamous progenitor[J].Anna M Nicholson;;Trevor A Graham;;Ashley Simpson;;Adam Humphries;;Nicola Burch;;Manuel Rodriguez-Justo;;Marco Novelli;;Rebecca Harrison;;Nicholas A Wright;;Stuart A C McDonald;;Janusz A Jankowski.Gut,2012(10)

[4]Proton Pump Inhibitors Reduce the Risk of Neoplastic Progression in Patients with Barrett’s Esophagus[J].Florine Kastelein;;Manon C.W.Spaander;;Ewout W.Steyerberg;;Katharina Biermann;;Vera E.Valkhoff;;Ernst J.Kuipers;;Marco J.Bruno.Clinical Gastroenterology and Hepatology,2012

[5]李芳.胆汁酸在诱导Barrett's食管肠上皮化生作用中的机制及临床意义[D].济南大学,2019.