库蚊通用PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

库蚊通用PCR试剂盒是一种用于检测库蚊的试剂盒，采用聚合酶链式反应（PCR）技术进行检测。该试剂盒可以快速、准确地检测出库蚊中的特定基因，从而帮助研究人员了解库蚊的种群分布、繁殖情况、传播疾病等方面的信息。

库蚊通用PCR试剂盒的组成通常包括引物、Taq酶、dNTPs等必要的PCR反应成分，以及可能包含的各种成分如染料、缓冲液、特异性结合探针等。引物是PCR反应的关键成分，它们与目标基因的特定区域结合，从而启动DNA的扩增过程。Taq酶是一种耐热的DNA聚合酶，能够催化DNA的合成。dNTPs是合成DNA的基本原料。

使用库蚊通用PCR试剂盒进行检测时，首先需要提取库蚊的DNA，然后将DNA与试剂盒中的引物和Taq酶等成分混合，进行PCR反应。反应过程中，DNA会不断扩增，最终形成大量的特定基因片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行分析，可以判断出是否存在目标基因，从而确定库蚊的种类或疾病状态等信息。

库蚊通用PCR试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够在极低浓度下检测出目标基因。此外，该试剂盒还具有快速、简便、易于操作等特点，可以广泛应用于库蚊相关研究的现场调查、疾病监测等领域。然而，试剂盒也存在一定的局限性，如对实验条件和操作要求较高，可能出现假阳性或假阴性结果等问题，需要在使用时注意。

库蚊通用PCR试剂盒

库蚊通用PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据羊痘病毒PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在库蚊DNA的感染。

应用^[4-5]

库蚊通用PCR试剂盒可以用于云南省澜沧江流域蚊虫及蚊媒病毒调查研究

在云南省澜沧江上、中、下流域共选择10个居民点进行蚊虫分布调查，在蚊虫密度高峰季节，采用诱蚊灯法在畜圈和人房内进行夜间捕蚊。并于2010年，在下游地区村寨竹林采集伊蚊。对采集的蚊虫标本用白纹伊蚊C6/36细胞进行病毒分离、库蚊通用PCR试剂盒分子生物学鉴定和系统进化分析。同时收集疑似病人血清和脑脊液标本进行病毒分离和分子生物学鉴定。

库蚊通用PCR试剂盒结果显示，澜沧江流域居民点畜圈共采集到8属40种共计112344只蚊虫。其中构成比在前四位的蚊虫依次是三带喙库蚊（80.26%）、中华按蚊（8.35%）、环带库蚊（5.41%）和纹腿库蚊（2.42%），其余36种蚊虫的构成比均小于1.00%。在人房中共采集到7属32种4427只蚊虫，蚊虫构成比在前四位的蚊虫依次是三带喙库蚊（35.71%）、中华按蚊（27.51%）、纹腿库蚊（10.68%）、骚扰阿蚊（3.55%）。库蚊通用PCR试剂盒结果显示在上游地区畜圈中共采集到6属20种蚊虫，其中构成比在前四位的蚊虫依次是纹腿库蚊（36.47%）、三带喙库蚊（30.63%）、中华按蚊（14.85%）和昆明按蚊（11.63%）。人房中共采集到4属6种蚊虫，构成比在前四位的蚊虫依次是骚扰阿蚊（29.41%）、致倦库蚊（23.53%）、中华按蚊（17.65%）、多斑按蚊和白胸库蚊（11.76%）；库蚊通用PCR试剂盒结果显示在中游地区畜圈共采集到6属28种蚊虫，其中构成比在前四位的蚊虫依次是三带喙库蚊（84.03%）、中华按蚊（6.67%）、环带库蚊（5.49%）和纹腿库蚊（1.26%）。

参考文献

[1]A novel totivirus-like virus isolated from bat guano[J].Xinglou Yang;;Yunzhi Zhang;;Xingyi Ge;;Junfa Yuan;;Zhengli Shi.Archives of Virology,2012(6)

[2]Mesoniviridae:a proposed new family in the order Nidovirales formed by a single species of mosquito-borne viruses[J].Chris Lauber;John Ziebuhr;Sandra Junglen;Christian Drosten;Florian Zirkel;Phan Nga;Kouichi Morita;Eric Snijder;Alexander Gorbalenya.Archives of Virology,2012(8)

[3]Molecular phylogenetic and evolutionary analysis of Japanese encephalitis virus in China[J].S.P.CHEN.Epidemiology and Infection,2011

[4]Molecular phylogenetic and evolutionary analyses of Muar strain of Japanese encephalitis virus reveal it is the missing fifth genotype[J].Manal A.F.Mohammed;;Sareen E.Galbraith;;Alan D.Radford;;Winifred Dove;;Tomohiko Takasaki;;Ichiro Kurane;;Tom Solomon.Infection,Genetics and Evolution,2011(5)

[5]郭晓芳.云南省澜沧江流域蚊虫及蚊媒病毒调查研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,2015.