人支气管上皮样细胞的应用

背景^[1-3]

人支气管上皮样细胞(human bronchial epithelial cells)是存在于人体支气管内的一种细胞类型，主要负责保护呼吸道免受外界有害物质的侵害。

人支气管上皮样细胞具有以下特点：

形态特征：人支气管上皮样细胞呈多边形或长条形，大小约为10-30微米不等。

生理功能：人支气管上皮样细胞能够分泌黏液和纤毛，帮助清除呼吸道内的灰尘、细菌和其他有害物质。

分子特征：人支气管上皮样细胞表达多种分子，包括上皮细胞黏附分子(E-cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)和纤毛运动蛋白等，这些分子在维持细胞形态和功能方面起着重要作用。

人支气管上皮样细胞在许多疾病的发生和发展中都扮演着重要的角色，例如慢性阻塞性肺疾病、哮喘等。因此，对人支气管上皮样细胞的研究对于深入了解这些疾病的发病机制以及开发新的治疗方法具有重要意义。

人支气管上皮样细胞

人支气管上皮样细胞培养操作

1)复苏人支气管上皮样细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)人支气管上皮样细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)人支气管上皮样细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取

应用^[4-5]

人支气管上皮样细胞可以用于机械牵拉对人支气管上皮样细胞气道重塑相关因子表达的影响

研究机械牵拉人支气管上皮样(16HBE)细胞对转化生长因子-β1(TGF-β1)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)表达的影响及其相关信号转导机制。

方法：采用Flexcell-4000细胞柔性基底加载装置牵拉人支气管上皮样细胞,牵拉应力为15%,频率为1 Hz,加载时间分别为:0.5 h、1 h、1.5 h、2 h。选择TGF-β1、FGF-2和Ca2+相对表达较高的一组以经典瞬时感受器电位1(TRPC1)抑制剂SKF 96365、蛋白激酶C(PKC)抑制剂HA-100作为干预因素。将细胞分为不予以机械牵拉的空白对照组、机械牵拉组、机械牵拉+SKF 96365组、机械牵拉+HA-100组。应用Western检测TGF-β1、FGF-2蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测TGF-β1、FGF-2 mRNA的表达,流式细胞术检测细胞内Ca2+荧光强度。

结果：人支气管上皮样细胞在15%牵拉应力作用下,与对照组相比,4个时间点的TGF-β1蛋白和mRNA、FGF-2蛋白和mRNA、胞内Ca2+荧光强度均显著升高(p(27)0.05),作用0.5 h时其增幅最大,作用1 h出现降低,1.5 h、2 h表达量又逐渐升高。对0.5 h机械牵拉组予以SKF 96365、HA-100干预后,其TGF-β1、FGF-2 mRNA和蛋白的表达,以及Ca2+内流均较单纯牵拉组降低(p(27)0.05)。结论机械牵拉可导致人支气管上皮样细胞气道重塑相关因子表达增加,其信号通路可能与机械牵拉引起PKC活化,进一步激活TRPC1,引起Ca2+内流有关。

参考文献

[1]Age-dependent changes of stress and strain in the human heart valve and their relation with collagen remodeling[J].P.J.A.Oomen;;S.Loerakker;;D.van Geemen;;J.Neggers;;M.-J.T.H.Goumans;;A.J.van den Bogaerdt;;A.J.J.C.Bogers;;C.V.C.Bouten;;F.P.T.Baaijens.Acta Biomaterialia,2016

[2]Cardiac fibroblasts support cardiac inflammation in heart failure[J].Diana Lindner;;Christin Zietsch;;Juliane Tank;;Samuel Sossalla;;Nina Fluschnik;;Svenja Hinrichs;;Lars Maier;;Wolfgang Poller;;Stefan Blankenberg;;Heinz-Peter Schultheiss;;Carsten Tsch?pe;;Dirk Westermann.Basic Research in Cardiology,2014(5)

[3]Transforming growth factorβand severe asthma:A perfect storm[J].Mazen Al-Alawi;;Tidi Hassan;;Sanjay H.Chotirmall.Respiratory Medicine,2014

[4]TRPC1,CaN and NFATC3 signaling pathway in the pathogenesis and progression of left ventricular hypertrophy in spontaneously hypertensive rats[J].Guangrong Zou;;Huashan Hong;;Xiaohong Lin;;Xiaoyun Shi;;Ying Wu;;Lianglong Chen.Clinical and Experimental Hypertension,2014(3)

[5]余倩.机械牵拉对人支气管上皮样细胞气道重塑相关因子表达的影响[D].重庆医科大学,2018.