IOSE-29 人卵巢上皮细胞系的应用

背景^[1-3]

IOSE-29人卵巢上皮细胞系是一种常用的实验细胞系，用于研究卵巢上皮细胞的生物学特性和功能。这种细胞系由人的卵巢上皮细胞建立而来，具有维持卵巢上皮细胞生长和分化的能力。

IOSE-29人卵巢上皮细胞系在卵巢上皮肿瘤的研究中具有广泛的应用价值。通过利用这种细胞系，研究人员可以深入研究卵巢上皮细胞的增殖、分化、迁移和侵袭等生物学过程，了解卵巢上皮肿瘤的发生、发展、转移和耐药机制。此外，IOSE-29人卵巢上皮细胞系还可以用于评估和筛选对卵巢上皮肿瘤具有治疗作用的药物或化合物，以及测试和开发新的卵巢上皮肿瘤治疗方法。

IOSE-29人卵巢上皮细胞系

IOSE-29人卵巢上皮细胞系细胞培养操作

1)复苏IOSE-29人卵巢上皮细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)IOSE-29人卵巢上皮细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)IOSE-29人卵巢上皮细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

IOSE-29人卵巢上皮细胞系可以用于β-hCG高表达促进人类卵巢上皮细胞恶性转化及裸鼠致瘤性的机制研究

探讨人绒毛膜促性腺激素在促进永生化人卵巢表面上皮细胞恶性转化中的作用,及其致瘤活性的分子发生机制,为卵巢上皮性癌的防治提供新的策略和方法。

方法1.简介本研究中的细胞系：(1)T29和T80细胞系：是由IOSE-29人卵巢上皮细胞系和IOSE-80,依次经SV40T/t抗原和人端粒酶逆转录酶的催化亚单位(hTERT),逆转录病毒转染产生的永生化的人卵巢表面上皮细胞系。T29和T80细胞系的非致瘤性已被本实验室的前期研究证实,该细胞系在本研究中作为亲代对照组。

(2) T29β-hCG和T80β-hCG细胞系：是T29和T80细胞经逆转录病毒转染β-hCG基因cDNA所产生的稳定表达β-hCG的永生化IOSE-29人卵巢上皮细胞系和IOSE-80细胞系。该细胞系在本研究中作为实验组。

2. 研究方法：(1)体外实验对照研究(流式细胞仪)分析2个实验组和2个亲代对照组永生化人卵巢表面上皮细胞的凋亡率；Western blot检测4组细胞在凋亡进程中促生存蛋白Bcl-XL的表达及促凋亡蛋白Bad的表达差异。

(2)体外实验对照研究(细胞增殖实验MTT)4组永稳定表达β-hCG的永生化IOSE-29人卵巢上皮细胞系和IOSE-80细胞系在培养24h、48h及60h或72h的细胞增殖差异；流式细胞仪分析各组细胞中G1期细胞、G2期细胞的百分率；Western blot检测细胞周期进程中的细胞周期相关蛋白cyclin E,cyclin D1及与其相应的细胞周期依赖性激酶CDK2、CDK4及CDK6在各组细胞中的表达差异。

(3)观察4组稳定表达β-hCG的永生化IOSE-29人卵巢上皮细胞系和IOSE-80细胞系在体外软琼脂的克隆形成率；分别将T29、T80、T29β-hCG及T80β-hCG细胞(5×106)移植于裸鼠皮下,观察其在裸鼠的成瘤率。免疫组织化学检测裸鼠肿瘤中相关蛋白的免疫反应模式及表达。

参考文献

[1]Screening for familial ovarian cancer:poor survival of BRCA1/2 related cancers.[J].Evans D G;;Gaarenstroom K N;;Stirling D;;Shenton A;;Maehle L;;Dørum A;;Steel M;;Lalloo F;;Apold J;;Porteous M E;;Vasen H F A;;van Asperen C J;;Moller P.Journal of medical genetics,2009

[2]Surgical outcome and survival analysis of young patients with primary epithelial ovarian cancer.[J].Fotopoulou Christina;;Savvatis Konstantinos;;Schumacher Guido;;Lichtenegger Werner;;Sehouli Jalid.Anticancer research,2009

[3]Improved progression-free and overall survival in advanced ovarian cancer as a result of a change in surgical paradigm[J].Dennis S.Chi;;Eric L.Eisenhauer;;Oliver Zivanovic;;Yukio Sonoda;;Nadeem R.Abu-Rustum;;Douglas A.Levine;;Matthew W.Guile;;Robert E.Bristow;;Carol Aghajanian;;Richard R.Barakat.Gynecologic Oncology,2009(1)

[4]KRAS mutation analysis in ovarian samples using a high sensitivity biochip assay[J].Auner Veronika;;Kriegshäuser Gernot;;Tong Dan;;Horvat Reinhard;;Reinthaller Alexander;;Mustea Alexander;;Zeillinger Robert.BMC Cancer,2009

[5]郭晓青.β-hCG高表达促进人类卵巢上皮细胞恶性转化及裸鼠致瘤性的机制研究[D].南方医科大学,2012.