NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系是一种用于研究人肺支气管癌的实验细胞系。这种细胞系由人肺支气管癌细胞建立而来，具有维持肺癌细胞生长和分化的能力。

NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系在肺癌研究中具有广泛的应用价值。通过利用这种细胞系，研究人员可以深入研究肺癌的生物学特性，了解肺癌的发生、发展、转移和耐药机制，以及探索肺癌治疗的新药和新方法。例如，研究人员可以使用NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系建立动物模型，模拟人类肺癌的发生和发展过程，从而更好地理解肺癌的发病机制和治疗方法。

此外，NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系还可以用于评估和筛选对肺癌具有治疗作用的药物或化合物，以及测试和开发新的肺癌治疗方法。这种细胞系具有生长稳定、易于培养和操作简便等特点，为相关研究提供了可靠的实验模型。

NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系

NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系可以用于新型P13K抗肿瘤抑制剂的合成与构效关系研究

信号转导在细胞的代谢、分裂、分化、及凋亡过程中起着重要作用,肿瘤发生和转移与细胞的过度激活有关,PI3K/Akt信号通路是细胞内重要的信号转导通路,通过影响下游多种效应分子的活化状态,发挥着抑制细胞凋亡和促进细胞增殖的重要作用。

因为PI3K是肿瘤的一个重要靶点,PI3K抑制剂的研究吸引了广泛关注。近年来,多个PI3K抑制剂已经进入临床研究阶段,包括GSK2126458、SF-1126、NVP-BEZ235、XL-147、PX-866、GDC-0941、ZSTK474、GSK2126458 BIBW-2992是不可逆EGFR和HER2双重抑制剂,抑制野生型、耐受和双重耐受的NCI-H1666人肺支气管癌贴壁细胞系、H3255和NC11875细胞(IC50分别为7、6和93 nM),现处于Ⅱ期临床研究,用于治疗乳腺癌和结直肠癌等。我们通过改变母核来看取代后的活性有没有提高。

阳性对照药GSK2126458的合成比较繁琐,用丙二酸亚异丙酯代替乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯,反应温度降低,缩短了合成步骤,同时,用sonagashira反应和Diels-Alder反应合成了哒嗪环,避免使用昂贵的4-碘哒嗪。

参考文献

[1]The molecular therapy of colorectal cancer[J].Maximilian J.Waldner;;Markus F.Neurath.Molecular Aspects of Medicine,2010(2)

[2]In vitro evaluation of pan-PI3-kinase inhibitor SF1126 in trastuzumab-sensitive and trastuzumab-resistant HER2-over-expressing breast cancer cells[J].Tuba Ozbay;;Donald L.Durden;;Tongrui Liu;;Ruth M.O’Regan;;Rita Nahta.Cancer Chemotherapy and Pharmacology,2010(4)

[3]PI3K Regulatory Subunits Lose Control in Cancer[J].Inma Martin-Berenjeno;;Bart Vanhaesebroeck.Cancer Cell,2009(6)

[4]The novel orally bioavailable inhibitor of phosphoinositol-3-kinase and mammalian target of rapamycin,NVP-BEZ235,inhibits growth and proliferation in multiple myeloma[J].Philipp Baumann;;Sonja Mandl-Weber;;Fuat Oduncu;;Ralf Schmidmaier.Experimental Cell Research,2008(3)

[5]刘昆.新型P13K抗肿瘤抑制剂的合成与构效关系研究[D].山东中医药大学,2012.