HSC-1 人皮肤鳞癌细胞系的应用

背景^[1-3]

HSC-1人皮肤鳞癌细胞系是一种用于研究人皮肤鳞癌的实验细胞系。这种细胞系是通过将人皮肤鳞癌组织种植在培养瓶内，并经过一定的培养条件而形成的。

HSC-1人皮肤鳞癌细胞系具有以下特点：

生物学特性：HSC-1人皮肤鳞癌细胞系保持了源自肿瘤组织的生物学特性，包括细胞的形态、生长方式、基因表达等方面。这种细胞系可以用于研究皮肤鳞癌的发生、发展、治疗及药物筛选等方面的实验。

培养条件：HSC-1人皮肤鳞癌细胞系需要在一定的培养条件下生长，如适当的温度、湿度、营养物质等。研究人员需要根据细胞系的生长特性，定期更换培养液，以保证细胞的正常生长和实验的准确性。

实验用途：HSC-1人皮肤鳞癌细胞系广泛应用于肿瘤学、药理学等领域的研究。通过这种细胞系，可以研究皮肤鳞癌的细胞生物学行为、探索肿瘤发生发展的机制、筛选抗肿瘤药物等。

安全性：HSC-1人皮肤鳞癌细胞系是一种实验细胞系，需要在生物安全柜内进行操作，以防止交叉污染和意外感染等风险。研究人员需要遵守相关的实验室安全规定，确保实验过程的安全性。

HSC-1人皮肤鳞癌细胞系

HSC-1人皮肤鳞癌细胞系培养操作

1)复苏HSC-1人皮肤鳞癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)HSC-1人皮肤鳞癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)HSC-1人皮肤鳞癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

HSC-1人皮肤鳞癌细胞系可以用于抑癌基因HOXA9抑制皮肤鳞状细胞癌进展的机制研究

研究发现miR-365可以促进皮肤鳞癌的发展,这提示我们miR-365在皮肤鳞癌的发展过程中可能通过对上下游靶基因的调控来发挥促进癌症的作用。但是对miR-365促进皮肤鳞癌的发展机制尚不清楚,所以我们进一步对miR-365的下游靶基因进行探索。

通过确定HOXA9在皮肤鳞癌中作为miR-365的靶基因,采用生物功能学实验以及检验HOXA9对皮肤鳞癌糖酵解影响来验证HOXA9在皮肤鳞癌进展中发挥的作用。

实验方法①采用qPCR的方法检测miR-365和HOXA9在人正常皮肤细胞与皮肤鳞癌细胞系基因水平表达情况,采用Western Blot检测HOXA9在蛋白水平上的表达情况,IHC检测皮肤鳞癌组织中HOXA9蛋白表达水平并分析其与鳞癌分化程度之间的关系;

②生物信息学预测miR-365的靶基因,并进行验证;

③采用CCK-8实验检测沉默和过表达HOXA9后皮肤鳞癌HSC-1人皮肤鳞癌细胞系细胞的增殖能力变化;

④采用Transwell实验检测沉默和过表达HOXA9后皮肤鳞癌HSC-1人皮肤鳞癌细胞系细胞迁移和侵袭能力变化;

⑤采用流式细胞实验检测沉默和过表达HOXA9后皮肤鳞癌HSC-1人皮肤鳞癌细胞系细胞的凋亡变化;

⑥采用Seahorse细胞外代谢检测系统检测沉默和过表达HOXA9后细胞代谢方式的改变。

结果①相比于正常皮肤细胞,miR-365在皮肤鳞癌细胞中高表达(P<0.05),HOXA9在基因和蛋白水平低表达,HOXA9表达水平越低,皮肤鳞癌分化程度越低;

②沉默HOXA9之后,人皮肤鳞癌HSC-1人皮肤鳞癌细胞系细胞增殖能力增强(P<0.001),过表达HOXA9之后,人皮肤鳞癌HSC-1细胞增殖能力降低(P<0.001);

③沉默HOXA9之后,人皮肤鳞癌HSC-1人皮肤鳞癌细胞系细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.01),过表达HOXA9之后,人皮肤鳞癌HSC-1细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.01);

④沉默HOXA9后HSC-1人皮肤鳞癌细胞系细胞凋亡减少(P<0.05),过表达HOXA9后HSC-1细胞凋亡增加(P<0.05);

⑤下调HOXA9后HSC-1人皮肤鳞癌细胞系细胞OCR减少,ECAR增加;上调HOXA9后HSC-1细胞OCR增加ECAR减少。

结论HOXA9能够抑制人皮肤鳞状细胞癌的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,通过调控糖酵解通路抑制皮肤鳞状细胞癌的发展。

参考文献

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