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NCI-H322人肺癌贴壁细胞系的应用

发布日期:2024/1/8 9:28:26

背景[1-3]

NCI-H322人肺癌贴壁细胞系是一种用于研究肺癌的实验细胞系。它来自人肺腺癌的贴壁细胞,具有维持肺癌细胞生长和分化的能力。

NCI-H322人肺癌贴壁细胞系在肺癌研究中具有广泛的应用价值。通过利用这种细胞系,研究人员可以深入研究肺癌的生物学特性,了解肺癌的发生、发展、转移和耐药机制,以及探索肺癌治疗的新药和新方法。例如,研究人员可以使用NCI-H322人肺癌贴壁细胞系建立动物模型,模拟人类肺癌的发生和发展过程,从而更好地理解肺癌的发病机制和治疗方法。

此外,NCI-H322人肺癌贴壁细胞系还可以用于评估和筛选对肺癌具有治疗作用的药物或化合物,以及测试和开发新的肺癌治疗方法。这种细胞系具有生长稳定、易于培养和操作简便等特点,为相关研究提供了可靠的实验模型。

NCI-H322人肺癌贴壁细胞系.png

NCI-H322人肺癌贴壁细胞系

NCI-H322人肺癌贴壁细胞系培养操作

1)复苏NCI-H322人肺癌贴壁细胞系:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCI-H322人肺癌贴壁细胞系传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。

3)NCI-H322人肺癌贴壁细胞系冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用[4-5]

NCI-H322人肺癌贴壁细胞系可以用于肺癌细胞HMGB1对IFN-γ诱导PD-L1表达水平影响的研究

探讨了肺癌组织中HMGB1与其受体RAGE结合后,抑制JAK/STAT3通路的磷酸化,从而抑制对IFN-γ所诱导的肺癌细胞表面PD-L1的调节作用,进一步可以协同增强CD8+T细胞分泌效应性细胞因子的能力,增强其杀伤功能,为肺癌患者的免疫治疗甚至联合治疗提供参考的新思路。

方法:利用TCGA数据库分析肺癌中HMGB1与PD-L1表达的相关性;利用石蜡切片的免疫组织化学染色,检测郑州大学第一附属医院胸外科于2013年-2015年手术切除的肺癌组织石蜡切片上HMGB1及PD-L1的表达相关性;利用流式细胞术检测本实验室现有的肺癌细胞株PD-L1的表达水平,筛选出PD-L1表达相对较高的A549及NCI-H322人肺癌贴壁细胞系两株细胞系进行后续实验研究;

在培养A549及NCI-H322人肺癌贴壁细胞系的过程中,外源加入人的HMGB1重组蛋白,进行流式细胞术、荧光定量PCR及Western-blot实验,检测HMGB1对PD-L1表达水平的影响;体外构建PD-L1过表达的A549细胞系,外源加入人的HMGB1重组蛋白,进行流式细胞术及荧光定量PCR实验检测HMGB1对PD-L1表达水平的影响;外源加入人IFN-γ诱导PD-L1表达升高之后,再加入人重组HMGB1蛋白,进行流式细胞术及荧光定量PCR实验检测PD-L1表达的变化;

体外将A549的HMGB1表达敲低,外源加入人IFN-γ后进行流式细胞术、荧光定量PCR及细胞的免疫荧光实验检测PD-L1的表达;在培养A549及NCI-H322人肺癌贴壁细胞系的过程中,外源加入人IFN-γ诱导PD-L1表达升高之后,再加入人重组HMGB1蛋白,利用Western-blot实验检测JAK/STAT3通路磷酸化水平;体外将A549的HMGB1表达敲低,外源加入人IFN-γ后提取蛋白,利用Western-blot实验检测JAK/STAT3通路磷酸化水平;外源加入TLR4或RAGE抑制剂后,利用流式细胞术及Western-blot实验检测PD-L1的表达及JAK/STAT3通路磷酸化水平;将HMGB1处理后的A549细胞上清与CD8+T细胞共孵育,利用流式细胞术检测效应分子颗粒酶Granzyme B及穿孔素Perforin的表达。

参考文献

[1]Global cancer statistics 2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].Freddie Bray BSc,MSc,PhD;;Jacques Ferlay ME;;Isabelle Soerjomataram MD,MSc,PhD;;Rebecca L.Siegel MPH;;Lindsey A.Torre MSPH;;Ahmedin Jemal PhD,DVM.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2018(6)

[2]A Paradigm Shift in Cancer Immunotherapy:From Enhancement to Normalization[J].Miguel F.Sanmamed;;Lieping Chen.Cell,2018

[3]Emerging biomarkers for immune checkpoint inhibition in lung cancer[J].George Cyriac;;Leena Gandhi.Seminars in Cancer Biology,2018

[4]Regulation and Function of the PD-L1 Checkpoint[J].Chong Sun;;Riccardo Mezzadra;;Ton N.Schumacher.Immunity,2018

[5]王淑敏.肺癌细胞HMGB1对IFN-γ诱导PD-L1表达水平影响的研究[D].郑州大学,2019.

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