产酸克雷伯菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

产酸克雷伯菌PCR试剂盒是一种用于检测产酸克雷伯菌的实验工具，采用聚合酶链式反应（PCR）技术进行检测。该试剂盒具有高灵敏度和特异性，能够快速、准确地检测出产酸克雷伯菌，对于该病的诊断和治疗具有重要意义。

产酸克雷伯菌是一种常见的肠道细菌，可在人体肠道内正常寄生。然而，当产酸克雷伯菌过度繁殖或发生变异时，它会引起感染，导致腹泻、发热、呕吐等症状。因此，对产酸克雷伯菌进行快速、准确的检测对于诊断和治疗该病具有重要意义。

产酸克雷伯菌PCR试剂盒的组成通常包括引物、Taq酶、dNTPs等必要的PCR反应成分，以及可能包含的各种成分如染料、缓冲液、特异性结合探针等。引物是PCR反应的关键成分，它们与产酸克雷伯菌基因的特定区域结合，从而启动DNA的扩增过程。Taq酶是一种耐热的DNA聚合酶，能够催化DNA的合成。dNTPs是合成DNA的基本原料。

使用产酸克雷伯菌PCR试剂盒进行检测时，首先需要采集感染产酸克雷伯菌的样本，如粪便、血液或其他相关样本。将样本中的DNA或RNA与试剂盒中的引物和Taq酶等成分混合，进行PCR反应。反应过程中，DNA或RNA会不断扩增，最终形成大量的特定基因片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行分析，可以判断出是否存在产酸克雷伯菌基因，从而确定患者是否感染该病原体。

产酸克雷伯菌PCR试剂盒

产酸克雷伯菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据产酸克雷伯菌PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在产酸克雷伯菌的感染。

应用^[4-5]

产酸克雷伯菌PCR试剂盒可以用于肠杆菌科细菌耐药机制以及UPEC对HeLa细胞的致病性研究

研究临床分离的产酸克雷伯菌和阴沟肠杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药和/或敏感性降低的分子机制。

方法:临床分离到一株对碳青霉烯类抗生素耐药的产酸克雷伯菌ZC101和一株对碳青霉烯类抗生素不敏感的阴沟肠杆菌ZY106。采用琼脂稀释法进行抗生素最低抑菌浓度(MIC)的测定。以大肠杆菌EC600或C600作为受体菌进行接合实验。等电聚焦电泳(IEF)检测产酸克雷伯菌ZC101、阴沟肠杆菌ZY106和它们的大肠杆菌接合子产β-内酰胺酶情况。PCR和DNA测序确定耐药基因的基因型。质粒消除实验证实外膜蛋白缺失是否可以引起对碳青霉烯类抗生素感性下降。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析产酸克雷伯菌ZC101外膜蛋白表达情况,并使用产酸克雷伯菌PCR试剂盒对OmpK35和OmpK36基因进行PCR扩增和DNA序列分析。Urea-SDS-PAGE分析阴沟肠杆菌ZY106的外膜蛋白表达情况。

结果：亚胺培南、美罗培南和厄他培南对产酸克雷伯菌ZC101的MIC分别为16μg/ml、16μg/ml和128μg/ml;对阴沟肠杆菌ZY106的MIC分别为2μg/ml、4μg/ml和16μg/ml。接合实验证实产酸克雷伯菌ZC101可将耐药质粒传递给受体菌大肠杆菌EC600,使其对碳青霉烯类抗生素的敏感性明显降低(MIC值至少上升4倍)。产酸克雷伯菌ZC101的blaIMP-4编码质粒被消除后菌株仍然对碳青酶烯类抗生物素有较高的耐药性。阴沟肠杆菌ZY106可将耐药质粒传递给大肠杆菌C600,使碳青霉烯类抗生素的MIC由接合前的≤0.0625μg/ml变为接合后的0.25μg/ml～0.5μg/ml。IEF、产酸克雷伯菌PCR试剂盒PCR扩增和序列分析证实ZC101产IMP-4型金属β-内酰胺酶和CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶,而转移接合子只产IMP-4。blaIMP-4基因位于大小约3000 bp的Ⅰ类整合子上,该整合子位于大小约55 kb的质粒上。

参考文献

[1]Cytotoxic necrotizing factor 1(CNF1)induces an inflammatory response in the urinary tract in vitro but not in vivo,[J]..Toxicon,2008(8)

[2]Ertapenem resistance among Klebsiella and Enterobacter submitted in the UK to a reference laboratory[J].Neil Woodford;;John W.T.Dallow;;Robert L.R.Hill;;Marie-France I.Palepou;;Rachel Pike;;M.Elaina Ward;;Marina Warner;;David M.Livermore.International Journal of Antimicrobial Agents,2007(4)

[3]Biofilm Formation in Uropathogenic Escherichia coli Strains:Relationship With Prostatitis,Urovirulence Factors and Antimicrobial Resistance[J].S.M.Soto;;A.Smithson;;J.A.Martinez;;J.P.Horcajada;;J.Mensa;;J.Vila.The Journal of Urology,2007(1)

[4]First IMP-1-producing Klebsiella pneumoniae isolate in Turkey[J].Z.Aktas;;C.Bal;;K.Midilli;;L.Poirel;;P.Nordmann.Clinical Microbiology and Infection,2006(7)

[5]周宏伟.肠杆菌科细菌耐药机制以及UPEC对HeLa细胞的致病性研究[D].浙江大学,2009.