KBM-7 人慢性髓白血病细胞系的应用

背景^[1-3]

KBM-7人慢性髓白血病细胞系是一种来源于人慢性髓性白血病的细胞系。它是一种常用的实验材料，被广泛用于研究肿瘤生物学、药物筛选和治疗策略等领域。

KBM-7人慢性髓白血病细胞系具有以下特点：

高度增殖：KBM-7人慢性髓白血病细胞系具有快速增殖的能力，可以在体外培养条件下快速生长。

多药耐药性：KBM-7人慢性髓白血病细胞系对多种化疗药物表现出耐药性，这使得它成为研究肿瘤耐药机制的重要模型。

可移植性：KBM-7人慢性髓白血病细胞系可以通过移植到小鼠体内来研究肿瘤的生长和转移情况。

KBM-7人慢性髓白血病细胞系是一种来源于人类慢性髓原白血病的细胞系，通常用于研究慢性髓原白血病的生物学特性和治疗机制。这些细胞系具有特定的形态和生物学特性，如细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期等，可以用于研究慢性髓原白血病的发病机制、药物筛选和治疗策略等方面的研究。

KBM-7人慢性髓白血病细胞系

KBM-7人慢性髓白血病细胞系细胞培养操作：

1)复苏KBM-7人慢性髓白血病细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)KBM-7人慢性髓白血病细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)KBM-7人慢性髓白血病细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

KBM-7人慢性髓白血病细胞系可以用于乳香挥发油抗肿瘤的作用机制研究

探讨乳香挥发油及其脂质体和3-Keto-tirucall-8,24-dien-21-oicacid(KTDA)体外抑制肿瘤细胞(人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞株SMMC—7721、KBM-7人慢性髓白血病细胞系、人宫颈癌细胞系Hela、人舌癌细胞系Tca 8113)增殖及诱导凋亡的作用,旨在阐明它们抗肿瘤的可能作用机制。

方法:使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油及其脂质体和KTDA对5种肿瘤细胞的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察5种肿瘤细胞的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测其对细胞DNA降解的影响。利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC—7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察乳香挥发油诱导凋亡调控基因Bax和Bcl-2蛋白的表达变化。

结果:1.乳香挥发油浓度为700、70、7、0.7、0.07 ug.mL-1,作用24 h时,能抑制SMMC—7721细胞的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为70 ug.mL-1时,作用48h和72h,电泳结果显示了DNA梯状条带:72h,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白Bax的表达增强,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达无明显变化。

2.乳香挥发油浓度为700、70、7 ug.mL-1,脂质体含挥发油浓度为143、14.3、1.43 ug.mL-1,对比实验,作用72 h时,能抑制人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞株SMMC—7721、KBM-7人慢性髓白血病细胞系、人宫颈癌细胞系Hela、人舌癌细胞系Tca 8113的生长,并呈浓度依赖性。当乳香挥发油浓度为70 ug.mL-1、脂质体浓度为14.3 ug.mL-1,作用72 h后,荧光显微镜下观察到凋亡小体,电泳结果显示典型的DNA梯状条带。

3.KTDA浓度为100、10、1 ug.mL-1,作用72 h时,能抑制人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞株SMMC—7721、KBM-7人慢性髓白血病细胞系、人宫颈癌细胞系Hela、人舌癌细胞系Tca 8113的生长,并呈浓度依赖性。当KTDA浓度为10 ug.mL-1时,处理72 h后,于荧光显微镜下观察到凋亡小体,电泳结果显示典型的DNA梯状条带。

结论:1.乳香挥发油及其脂质体和KTDA对人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞株SMMC—7721、KBM-7人慢性髓白血病细胞系、人宫颈癌细胞系Hela、人舌癌细胞系Tca 8113有明显的生长抑制作用,其抑制效果随着作用时间的延长(乳香挥发油)、浓度的加大而逐渐增强。

2.乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC—7721的增殖,且细胞阻滞于G1期,并可能通过上调Bax/Bcl-2的比例诱导SMMC—7721细胞的凋亡。

3.由半数抑制浓度(IC50)的数值表明,乳香挥发油及其脂质体和KTDA对MCF-7、SMMC—7721、K562、Hela比较敏感,Tca 8113次之,并可能通过诱导5种肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤的作用。

参考文献

[1]Acacetin-induced cell cycle arrest and apoptosis in human non-small cell lung cancer A549 cells[J].Ya-Ling Hsu;;Po-Lin Kuo;;Chi-Feng Liu;;Chun-Ching Lin.Cancer Letters,2004(1)

[2]Apoptosis-regulating proteins as targets for drug discovery[J].John C Reed.Trends in Molecular Medicine,2001(7)

[3]Drug targeting[J].Vladimir P Torchilin.European Journal of Pharmaceutical Sciences,2000

[4]CELL PROLIFERATION,APOPTOSIS,BCL-2 AND BAX EXPRESSION IN OBSTRUCTED OPOSSUM EARLY METANEPHROI[J].HELEN LIAPIS;;HONG YU;;GEORGE F.STEINHARDT.The Journal of Urology,2000(2)

[5]肖娟.乳香挥发油抗肿瘤的作用机制研究[D].中南大学,2009.